[发明专利]松肉粉中木瓜蛋白酶活力的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及调味料技术领域，具体涉及松肉粉中木瓜蛋白酶活力的检测方法。

背景技术

松肉粉也叫“嫩肉粉”，广泛应用于餐饮行业，使肉类制品口感达到爽滑鲜嫩、口感松软、形状饱满的效果。

为了增强松肉粉的对肉类的嫩化效果，通常松肉粉中含有木瓜蛋白酶。然而，木瓜蛋白酶的活力对于松肉粉对肉类的嫩化效果非常关键，因此，测定松肉粉中木瓜蛋白酶的活力十分必要。

酶活力是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度越快，酶活力越高，反之活力越低。测定酶活力实际就是测定酶促反应的速度。酶促反应速度可用单位时间内、单位体积中底物的减少量或产物的增加量来表示。然而，现有技术中关于松肉粉中木瓜蛋白酶活力的测量不够精确，且存在重复性差的缺陷。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供松肉粉中木瓜蛋白酶活力的检测方法，该松肉粉中木瓜蛋白酶活力的检测方法具有测量精确，且重复性好的优点。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

提供松肉粉中木瓜蛋白酶活力的检测方法，它包括以下步骤：

步骤一、研磨松肉粉：将松肉粉置于研钵中，然后滴入酶稀释液研磨，直至不出现细小颗粒为止，得到研磨混合物；

步骤二、稀释：往步骤一得到的研磨混合物中加入酶稀释液，混合均匀后，得到待测样品溶液；

步骤三、待测样品酶测试的吸光度的测定：取两支带塞试管各精确加入待测样品溶液1mL，置恒温水浴中预热，然后精确加入酪蛋白溶液5mL，同时启动秒表计时，振荡旋流使之充分混合，然后将试管封口放回水浴，并准确计时10min，立即精确加入三氯乙酸溶液5mL，摇匀，然后水浴保温30min，过滤得到滤液，以水做空白于280nm波长测定滤液的吸光度A ₁，即为待测样品酶测试的吸光度；

步骤四、待测样品空白测试的吸光度的测定：另取两支带塞试管各精确加入待测样品溶液1mL，置恒温水浴中预热，然后精确加入5mL三氯乙酸溶液，准确计时10min，然后精确加入酪蛋白5mL，摇匀，然后水浴保温30min，过滤得到滤液，以水做空白于280nm波长测定滤液吸光度A_O，即为待测样品空白测试的吸光度；

步骤五、酪氨酸标准液的吸光度的测定：另精确称取L-酪氨酸标准品0.050g，用0.1mol/L盐酸溶解，并用水定容至1000mL，然后用水做空白在280nm波长测定吸光度As，即为酪氨酸标准液的吸光度；

步骤六、计算酶活力：所述酶活力的计算公式如下：

式中：

A₁——待测样品酶测试的吸光度；

Ao——待测样品空白测试的吸光度；

11——参加反应的溶液总体积，单位为毫升(mL)；

n——样品稀释总倍数；

As——酪氨酸标准液的吸光度；

50——酪氨酸标准液浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；

10——反应时间，单位为分钟(min)；

m——样品质量，单位为克(g)。

上述技术方案中，所述酶活力的计算公式中，所述样品稀释总倍数为200。

上述技术方案中，所述步骤一中，研磨松肉粉：精确称取松肉粉样品1g～2g，将松肉粉置于研钵中，然后滴入酶稀释液研磨，直至不出现细小颗粒为止，得到研磨混合物。

上述技术方案中，所述步骤二中，稀释：往步骤一得到的研磨混合物用水稀释定容至100mL容量瓶中，得到样品稀释液，然后吸取5mL样品稀释液和5mL酶稀释液混合摇匀，作为待测样品溶液。

上述技术方案中，所述步骤三中，所述恒温水浴中预热的温度为38℃～42℃，预热时间为8min～12min。

上述技术方案中，所述步骤四中，所述恒温水浴中预热的温度为38℃～42℃，预热时间为8min～12min。

上述技术方案中，所述步骤一中，所述酶稀释液的制备方法为：精确称取0.528g L-半胱氨酸盐酸盐及0.224g乙二胺四乙酸二钠，用90mL浓度为0.05mol/L的磷酸氢二钠溶液溶解，然后用浓度为0.1mol/L的氢氧化钠溶液或0.1mol/L的盐酸溶液调至pH＝0.6，加水定容至100mL，即制得所述酶稀释液；

其中所述步骤一使用的酶稀释液为新鲜配制的酶稀释液。