[发明专利]一种诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成破骨样细胞的方法

说明书

本发明涉及细胞生物学及生物医药技术领域，本发明公开了一种诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成破骨样细胞的方法，包括以下步骤：大鼠骨髓间充质干细胞的分离及培养；采用流式细胞术鉴定分离的大鼠骨髓间充质干细胞表面分子；采用硫代乙酰胺诱导大鼠骨髓间充质干细胞3至7天，即可得到破骨样细胞，经过抗酒石酸酸性磷酸酶染色，免疫印迹技术，免疫荧光技术鉴定后，证实其具有破骨细胞特性，可供科学研究，从而发现一种新型体外获得破骨细胞生成的体系。此外，本发明所使用的硫代乙酰胺因其价格低廉，容易获取，使用方便，可作为制备骨与关节病变细胞模型和药物筛选模型的药物，弥补了对该病研究的一大缺陷，并具有广阔的市场应用前景。

技术领域

本发明涉及细胞生物学及生物医药技术领域，具体涉及一种诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化成破骨样细胞的方法。

背景技术

我国是世界上老年人口最多的国家，其数量占到了世界老年人口总量的五分之一。按照国际标准，我国早已于1999年进入老龄化社会。随着老年人口数量的持续增加，特别是肥胖老年人口的增多，骨与关节退行性疾病人群剧增。据统计，65岁以上老年人骨关节疾病患病率高达80％-90％。骨与关节退行性病变得到了我国乃至全球医学界的广泛关注，然而，其临床治疗始终是个难题。目前，骨与关节退行性疾病已经成为老年人的常见病和多发病之一，成为继心脑血管疾病、糖尿病、恶性肿瘤三大慢性病之后对人类威胁最广泛的疾病，严重危害到了老年人的健康和生活质量。骨与关节退行性病是以反复发作的关节疼痛和关节活动障碍为主的慢性退行性病变，其病理变化主要发生在活动关节，特别是负重关节的退行性疾患表现突出。在人体关节中，膝、髋关节除了支撑全身重量外，还要作多种活动，所以膝、髋关节退行性骨关节病最为常见。西医认为，骨与关节退行性变是多因性的疾病，与衰老、遗传、内分泌、肥胖、免疫和机械损伤等有关。然而，除了衰老和机械损伤是公认的危险因素外，其他致病因素尚无充分的实验依据。中医却对骨与关节退行性疾病有不同的理解，认为肾主骨、肝主筋，肝肾亏损则不能养骨荣筋。所以，中医认为骨与关节退行性疾病是因为肝肾虚亏、筋骨失养、长期劳损、气滞血瘀、风寒湿邪痹阻经脉所致。尽管如此，中、西医目前尚无法确切阐明骨与关节退行性疾病的直接原因。

骨是由细胞、细胞外基质和无机物组成的结缔组织，并通过骨组织细胞进行着骨塑建和重建过程。其中，成骨细胞、骨细胞和破骨细胞是构成骨组织代谢的基本功能细胞，成骨细胞能够促进骨的形成，而破骨细胞负责骨的吸收。当破骨细胞与成骨细胞作用失衡时就会引起骨与关节的病变。目前，国内外学者对成骨细胞与破骨细胞的形成分化有着极大的兴趣，破骨细胞的骨吸收与成骨细胞的骨形成之间的平衡是维持正常骨重建基础。破骨细胞是体内唯一具有骨质吸收功能的多核巨细胞，骨吸收过程中破骨细胞的形成与活性异常可导致以骨质疏松为代表的骨与关节病变。