[发明专利]苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖亲水色谱固定相及其制备和应用

说明书

本发明涉及色谱固定相，具体的说是一种苯甲醛‑2‑磺酸钠衍生化壳聚糖亲水色谱固定相及其制备和应用。固定相为式一所示，其由壳聚糖与苯甲醛‑2‑磺酸钠反应得到部分苯甲醛‑2‑磺酸钠修饰的壳聚糖(修饰度DD＝10％～90％)；通过3‑(2,3‑环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷对硅胶表面进行改性后与部分苯甲醛‑2‑磺酸钠修饰的壳聚糖(修饰度DD＝10％～90％)进行环氧烷与氨基的开环反应，得到预期固定相。本发明固定相制备方法简单，应用广泛，重现性好，具有很好的应用前景。

技术领域

本发明涉及色谱固定相，具体的说是一种苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖亲水色谱固定相及其制备和应用。

背景技术

亲水作用色谱(HILIC)是近年来发展起来的用于分离强极性化合物的色谱技术，是一种以极性固定相(如硅胶或衍生硅胶)及含高浓度极性有机溶剂和低浓度水溶液为流动相的色谱模式。与RPLC相比，HILIC能够保留极性和亲水性溶质；与NPLC相比，HILIC所用水-有机溶剂流动相又有利于极性和亲水性样品的溶解。另外，因其无需离子化试剂，HILIC能够很好地与质谱进行联机，并且HILIC所使用的流动相能够提高质谱的灵敏度。因此，HILIC对极性和亲水性小分子、碳水化合物、糖以及多肽等化合物显示出优异的分离能力。目前已有成熟的商品化的亲水作用色谱固定相在市场上销售，根据其键合基团的结构可分为醇型、胺型、两性离子型、氰基型、多糖型和纯硅胶型等等。但是，由于实际样品的复杂性和分离要求的多样性，目前还没有一种亲水作用色谱能够满足大部分极性化合物分离的要求，因此开发新型亲水作用色谱固定相是一项十分重要的工作。

壳聚糖是由自然界广泛存在的几丁质经过脱乙酰作用得到的，是一种由2-氨基-2-脱氧-D-葡萄糖以β-1,4糖苷键缩合而成的天然氨基多糖。由于其分子中有活泼的羟基和氨基，具有明显的亲水性，近年来被广泛的应用于亲水性色谱分离的研究，并表现出优异的特性。壳聚糖中的氨基基团进行苯甲醛-2-磺酸钠修饰，能使得其衍生物的亲水性能得到大幅度地提高，同时也对氨基基团进行了保护，提高了衍生物的稳定性。因此，利用壳聚糖其特定性质开发一种应用在亲水作用色谱中，能够较好的分离大部分极性化合物是一件十分重要的工作。

发明内容

本发明的目的在于提供一种苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖亲水色谱固定相及其制备方法和应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖亲水色谱固定相，固定相为式一所示：

所述固定相为将硅烷偶联剂键合到硅胶载体上实现硅烷化硅胶，而后进一步通过硅烷偶联剂中环氧烷与氨基的开环反应，将苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖键合到硅胶载体上，进而获得式一所示苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖型亲水作用色谱固定相。

所述硅烷化硅胶为将活化的微球型硅胶、有机溶剂、硅烷偶联剂按质量比为1:(8-35):(2.5-3)混合，混合后于80～120℃条件下反应12～48小时，反应后过滤、洗涤，洗涤真空干，即得硅烷化硅胶。其中，有机溶剂为无水甲苯，每克硅胶所需的质量为9～35克，约10～40mL；所述反应后经过滤后依次用二氯甲烷、甲醇、丙酮洗涤，洗涤后50～110℃下真空干燥12～24小时。

一种苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖亲水色谱固定相的制备方法，固定相为将硅烷偶联剂键合到硅胶载体上实现硅烷化硅胶，而后进一步通过硅烷偶联剂中环氧烷与氨基的开环反应，将苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖键合到硅胶载体上，进而获得式一所示苯甲醛-2-磺酸钠衍生化壳聚糖型亲水作用色谱固定相。

具体为：

(1)将硅胶经硅烷化试剂处理得硅烷化硅胶