[发明专利]一种均相免疫检测方法及其应用

说明书

本发明涉及一种均相免疫检测方法，其包括至少两个检测区域，在一个检测区域判断是否存在由供体‑待检抗体‑受体所形成的第一复合物，而在另一个检测区域判断是否存在由供体‑待检抗原‑受体所形成的第二复合物；其中，所述供体能够在激发状态下生成单线态氧，所述受体能与单线态氧反应产生可检测的信号。该方法解决了抗原抗体一步法检测中的高浓度样本HOOK效应问题和低浓度样本检测灵敏度偏低问题。同时该方法也解决了抗原抗体联合检测时不能区分阳性结果是抗体阳性或抗原阳性的问题。本发明所述方法特别适用于HIV抗原和抗体的联合检测中。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种均相免疫检测方法及其应用。

背景技术

免疫分析方法是利用抗原与抗体特异性结合而建立的高选择性生物化学方法。免疫分析根据标记与否分为标记免疫分析法和非标记免疫分析法。由于标记物的引入，不可避免地带来了结合的抗原-抗体与过量的抗原或抗体的分离问题，因而标记免疫分析法根据分离与否又分为均相免疫分析法和非均相免疫分析法。非均相免疫分析法需要包埋、洗脱、分离等多步操作，分析过程繁琐，分析时间长，不能满足快速检测和诊断的要求。均相法则有效避免了洗脱、分离等繁琐步骤，极大提高了分析效率和性价比，得到日益广泛的应用，具有取代传统非均相免疫分析的潜力。

但是，在某些运用均相免疫法检测的临床诊断项目中，需要对样本中的抗原和抗体同时进行检测。例如：人类免疫缺陷病毒(Human Immunodeficiency Virus，HIV)的检测，就需要即检测HIV抗体，同时也检测HIV抗原，这样就可以避免窗口期的患者因体内只有病毒抗原而没有相应的抗体或相应抗体滴度还不足以被检出时造成漏检的风险。

现有的抗原抗体联合检测方法中，样本中有待检抗原或抗体中的任何一种结果都反应为信号上升，其弊端在于无法区分阳性信号值是由抗原引起还是由抗体引起，从而不能准确判断病程，无法给临床治疗提供可靠的信息。同时目前运用均相免疫分析方法在抗原抗体一步法共同检测中还存在抗体高值阳性样本HOOK效应和抗原低端灵敏度检测等缺陷。

因此，亟待建立一种高效、可靠的用于抗原抗体联合检测的均相免疫检测方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足提供了一种高效、可靠的用于抗原抗体联合检测的均相免疫检测方法，该方法在至少两个检测区域中判断是否存在含有待测抗原和/或待测抗体的复合物的存在，解决了均相免疫分析方法中抗原抗体联合检测时不能区分阳性结果是抗体阳性或抗原阳性的问题。

为此，本发明在第一方面提供了一种均相免疫检测方法，其包括至少两个检测区域，在一个检测区域判断是否存在由供体-待检抗体-受体所形成的第一复合物，而在另一个检测区域判断是否存在由供体-待检抗原-受体所形成的第二复合物；其中，所述供体能够在激发状态下生成单线态氧，所述受体能与单线态氧反应产生可检测的信号。

根据本发明，当检测区域存在第一复合物和/或第二复合物时，用能量或者活性化合物激发供体产生单线态氧，所述受体与单线态氧反应生成可检测的化学发光信号。

在本发明的一些实施方式中，所述待检抗体选自与待检抗原特异性结合的完整抗体或基因工程化的抗体片段。

在本发明的另一些实施方式中，所述待检抗原选自多种不同病毒类型的抗原；在本发明的一些具体实施例中，所述待检抗原选自同一被分析物的不同亚型、亚亚型或流行重组型的抗原。

在本发明的一些实施方式中，所述受体和待检抗体通过标记抗原相连接；所述供体和待检抗体通过中间抗原相连接；所述标记抗原和中间抗原能够与待检抗体的不同表位特异性结合。

在本发明的一些具体实施例中，所述供体和中间抗原通过生物素-链霉亲和素的相互作用连接。

在本发明的一些实施方式中，所述受体和待检抗原通过标记抗体相连接；所述供体和待检抗原通过中间抗体相连接；所述标记抗体和中间抗体能够与待检抗原的不同表位特异性结合。