[发明专利]一种液态胶原填充剂的制备

权利要求书

1.一种液态胶原填充剂，其特征在于，由I 型胶原蛋白粉，悬浮于磷酸盐缓冲液或悬浮于生理盐水中制备而成；悬浮液中胶原的平均粒径为50~80μm；I 型胶原蛋白粉与磷酸盐缓冲液或生理盐水的质量百分比为0.01:100~50:100;

当使用I 型胶原蛋白粉时，先将I 型胶原蛋白粉加入到磷酸盐溶液或生理盐水中，在设定温度为0~15℃、压力为800~1300bar 条件下进行高压均质4~8 次至胶原平均粒径降至50~80μm，得到液态胶原填充剂;

由具有完整的天然的三螺旋结构的I 型胶原蛋白制成，其制备方法具体包括以下步骤：

（1）I 型胶原蛋白加入到盐酸溶液中，充分搅拌，用正压过滤器进行过滤得到滤液，再用氢氧化钠调节酸碱度并不断搅拌，制备出pH 值为6~7 的浆液；

（2）对滤液进行冷冻干燥形成胶原海绵；

（3）将冻干后的样品浸泡在含有无毒交联剂的缓冲溶液中，4℃进行交联反应，反应产物用磷酸氢二钠溶液浸泡1~4h，再用去离子水清洗；

（4）对清洗后的样品进行冷冻干燥；

（5）对冻干后的样品进行粉碎，得到粒径为100~200um 的胶原蛋白粉;

步骤(1)中的I 型胶原蛋白与盐酸溶液的质量体积比为0.01%~5%，盐酸溶液浓度为0.001~0.5mol/l，搅拌速度为1000~1500r/min，时间为2~4h；氢氧化钠的浓度为0.01~3mol/l，搅拌速度为1200~2000r/min，时间为1~4h；

步骤（2）中的冷冻干燥按照以下步骤进行：

a.预冷冻：先于-40℃下预冷冻60min，再于-20℃下预冷冻120~160min，并保持冷冻干燥机冷柜的温度在-60~-50℃；

b.干燥：先于-20℃干燥5h，然后于-10℃干燥5h，再于0℃干燥5h，于10℃干燥5h，于20℃干燥12h；

预冷冻和干燥阶段环境真空度为200~350 毫托；

步骤（3）中的交联剂为无毒的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐（EDC）/N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)，其中EDC 的浓度为0.05~5g/L，EDC 与NHS 的摩尔比为1:1~5:1，用MES 为缓冲剂将溶液的pH 值调为5.3~5.7，交联18~24h；磷酸氢二钠溶液的浓度为0.001~1mol/L。。

2.根据权利要求1 所述的液态胶原填充剂，其特征在于，步骤（4）中的冷冻干燥按照以下步骤进行：

a.预冷冻：先于-40℃下预冷冻60min，再于-20℃下预冷冻150~180min，并保持冷冻干燥机冷柜的温度在-60~-50℃；

b.干燥：分别依次于-20℃干燥7h、-15℃干燥7h、-10℃干燥7h、0℃干燥7h，再于20℃干燥15h。

3.根据权利要求1 所述的液态胶原填充剂，其特征在于，步骤（5）的粉碎采用冷冻研磨方式，研磨温度为-196℃，研磨时间为4~15min。。