[发明专利]一种葡聚糖支链度的测定方法

说明书

本发明涉及医药化学的测定技术领域，具体是一种葡聚糖支链度的测定方法，其技术方案是分别通过单位重量的葡聚糖经高碘酸氧化所生成甲酸的生成量a和PMP溶液与单位重量的葡聚糖进行反应的PMP消耗量b进行计算葡聚糖的支链度。本发明所具有的有益效果是：本发明以化学方法测定葡聚糖的还原端与非还原端数量，以此来确定葡聚糖中α‑1，6连接糖苷键数量(即支链数)，具体是通过单位重量的葡聚糖所生成甲酸的生成量a和PMP溶液与单位重量的葡聚糖进行反应的PMP消耗量b进行计算葡聚糖的支链度，与现有技术相比可获得更高的测定精度。

技术领域

本发明涉及医药化学的测定技术领域，具体是一种葡聚糖支链度的测定方法。

背景技术

淀粉作为生物大分子多糖混合物，天然淀粉一般含有两种组分：直链淀粉(amylose)和支链淀粉(amylopectin)，支链淀粉线性段以α-1，4连接，分支点以α-1，6连接，对淀粉结构测定的方法现有的文献报道有多种，大致可分为两类：传统的化学方法和波谱学法。

传统的化学方法大致有水解、氧化、甲基化、smith降解等，波谱学法大致分为：紫外分光光度法、红外光谱法等。传统化学方法对淀粉的结构分析尤其是对淀粉连接方式的测定步骤繁琐，不易操作，不同方法间测定结构有较大的差异，重现性差。

波谱学方法中紫外分光光度法主要以直链淀粉与支链淀粉与碘的复合物最大吸收波长的差异确定其比例，不适合分子量相对较小的葡萄糖聚合物；红外光谱法主要用于对淀粉基团的辨认，不能用于支化度的测定。

艾考糊精(α-1，4聚吡喃葡萄糖)是支链玉米淀粉的水解产物，艾考糊精和其他电解质合用在临床上用于腹膜透析。Baxter Healthcar Corporation公司生产的艾考糊精腹膜透析液(商品名EXTRANEAL)于2004年12月20日被美国FDA批准上市。

艾考糊精被α-淀粉酶代谢为具有较低程度的寡糖聚合(DP)，包括麦芽糖(DP2)，麦芽三糖(DP3)，麦芽四糖(DP4)和更高分子量多糖。

随着葡萄糖聚合物中1，6-连接产物的增加，容易在其体内蓄积而造成伤害，因此美国专利US6077836中公开了一种艾考葡萄糖聚合物的制备方法，其所用原料为干净预先洗涤的淀粉且α-1，6连接小于5％。美国FDA批准的艾考葡萄糖聚合物的说明书的“描述项”明确指出：艾考葡萄糖聚合物主链为α-1，4连接的葡萄糖聚合物，支链为α-1，6连接，并且α-1，6连接物不得超过10％。由此可见艾考葡萄糖聚合物α-1，6连接的测定对于产品的安全性就变得极为重要。但是现有的测定方法均存在着测定精度低的缺陷，比如双波长测定法，碘染色最大吸收波长变化，双波长测定方法受对照品影响较大，且由于分子量的变化对葡聚糖支链度测定不适用；核磁碳谱测定方法由于碳原子响应值低，峰重合等影响测定的准确性；核磁氢谱测定方法由于不同位置氢原子的响应值有差异，造成不能避免的测定误差。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有高准确度、测定误差小的葡聚糖支链度的测定方法。本发明的具体技术方案是：

一种葡聚糖支链度的测定方法，包括分别通过单位重量的葡聚糖所生成甲酸的生成量a和衍生试剂与单位重量的葡聚糖进行中和反应的PMP消耗量b进行计算葡聚糖的支链度。

优选地，所述单位重量的葡聚糖所生成甲酸量a的计算方法是通过葡聚糖在缓冲溶液中被高碘酸钠氧化，制备葡聚糖氧化待测液，然后利用色谱仪进行测量计算甲酸的生成量a。

优选地，所述单位重量的葡聚糖与衍生试剂反应，衍生试剂消耗量b的计算方法是通过葡聚糖在碱性溶液中与衍生试剂溶液反应，加入盐酸溶液进行中和反应后利用色谱仪进行测量计算衍生试剂消耗量b。

优选地，所述葡聚糖氧化待测液的制备方法是取高碘酸钠溶液与葡聚糖溶液混合后加入缓冲溶液，混合摇匀后置于0-10℃的环境中反应，反应结束后即得葡聚糖氧化待测液，其中所述葡聚糖的质量与高碘酸钠的质量之比为1∶0.5-5。