[发明专利]一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物分析技术和体外检测试剂技术领域，尤其涉及一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒及其应用。

背景技术

白血病是造血系统的一种恶性疾病，已成为严重威胁人民健康和生命的疾病。因此，早发现、早诊断、早治疗是提高急性白血病患者存活率的重要措施。然而，尽管多数急性白血病患者经化疗或造血干细胞移植后可以获得完全缓解，但是仍有许多患者在完全缓解后复发。白血病细胞经多次化疗产生耐药性是目前白血病治疗失败的主要原因之一。许多肿瘤在治疗过程中会对抗肿瘤药物产生耐性，使得抗肿瘤药物对肿瘤细胞失去了杀伤作用。

多药耐药性(MDR)是指肿瘤细胞接触一种抗肿瘤药物并产生耐药后，同时对结构和作用机理不同的多种来源的抗肿瘤药物具有交叉耐药性。约90％的白血病化疗失败和复发与多药耐药相关，所以MDR被认为是白血病化疗中的重要障碍，是引起白血病治疗失败的主要原因。多药耐药发生与多种因素有关，涉及白血病细胞的多药耐药基因(MDR1)及其编码的糖蛋白(P-gp)等。P-gp位于细胞膜表面，当细胞产生耐药性时，细胞表面的P-gp会过量表达。有资料报道，复发和耐药的白血病患者其P-gp表达明显增加。因此，快速检测出白血病细胞耐药性对于及时、准确的临床治疗及个体化用药等具有重大意义，对患者体内白血病细胞耐药性的准确测定对于临床追踪病情、判断预后、复发预测及至制定治疗方案等具有极其重要的意义。目前常用的检测方法为：流式细胞术(FCM)，实时荧光定量聚合酶链式反应(RQ-PCR)，蛋白质印迹法(Western Blot)等。然而，这些方法均存在一定的局限性:例如阳性率低、适用范围小、操作繁琐、成本高、灵敏度低、检测周期长、价格昂贵、检测方法复杂，加之耐药机制、肿瘤分型、体内或体外、个体差异等，实验室检查结果常常与临床存在巨大的差异，故在临床上应用受到一定的限制。因此寻求具有灵敏度高、特异性强、检测限低、稳定性好、经济适用、操作方便简单、准确可靠等特点的方法检测肿瘤多药耐药发生、发展中复杂变化，在其早期诊断和临床化疗中意义重大。

综上，发展高灵敏度、高特异性的耐药性白血病细胞检测及鉴别方法，以实施及时、有效的治疗，对于提高患者治愈率和生存率至关重要。而通过研究更先进的手段或者仪器设备，来实现准确、快速识别耐药细胞，为药物筛选、治疗方案制定提供相应的依据，同时为早期诊断提供相关数据，对医生用药的指导意思在临床治疗过程中具有重要意义。与以上方法相比，表面增强拉曼散射(Surface enhanced Raman scattering,SERS)技术具有信号强、灵敏度高、光谱窄、可多重检测的优势，可以实现样本的定性和定量测定检测及临床应用，对有效解决耐药蛋白检测有十分重要的意义。

SERS技术用通常的拉曼光谱法测定吸附在胶质金属颗粒表面的样品，或吸附在这些金属片的粗糙表面上的样品。被吸附的样品其拉曼光谱的强度可提高10^3-10^6倍，实现超灵敏检测。相比于传统检测技术，SERS具有光谱窄，能有效避免光谱重叠，在高通量检测方面具有独特优势。同时，SERS光谱的“指纹”特性使人们可以在复杂的生物环境中跟踪检测目标物。因其这些优势，SERS技术在药物分析、快速检测、物质测定及生物科学等领域得到广泛应用，成长为一种非常强大的分析工具。国内外已有报道SERS技术于肿瘤标志物检测的应用。然而，目前并未有将SERS技术用于鉴别耐药样本的统计数据，因此，对SERS检测技术进行优化，使其满足细胞株样本检测的高灵敏、高通量和快速可靠的需求，是一个迫在眉睫的任务。

发明内容

发明目的：为了克服现有技术中操作复杂耗时、样本及抗体需求量多、适用性低等的不足与缺陷，为了提高耐药患者检出率，本发明提供一种快速、简便、高灵敏的SERS免疫探针检测多药耐药蛋白的试剂盒及其应用，该试剂盒具有高度敏感性及特异性，能有效检测P-糖蛋白含量的高低。

技术方案：一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒，其特征在于：该试剂盒中采用的检测试剂包括硅包银胶的SERS探针与硅包裹Fe₃O₄的捕获磁珠。

其中，所述的SERS探针上连接P-糖蛋白抗体试剂用以检测耐药蛋白；所述的捕获磁珠上连接白细胞的抗体anti-CD45用以捕获靶细胞。