[发明专利]一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒，其特征在于：该试剂盒中采用的检测试剂包括硅包银胶的SERS探针与硅包裹Fe₃O₄的捕获磁珠。

2.根据权利要求1所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的SERS探针上连接P-糖蛋白抗体试剂用以检测耐药蛋白；所述的捕获磁珠上连接白细胞的抗体anti-CD45用以捕获靶细胞。

3.根据权利要求1所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的硅包银胶的SERS探针Ag@SiO₂的制备方法为：AgNO₃与柠檬酸钠溶液相互作用形成银胶，加入拉曼分子4-巯基苯甲酸、正硅酸乙酯TEOS并搅拌混匀，离心后收集底部沉淀重悬于去离子水中，形成Ag@4-MBA@SiO₂纳米粒；再加入戊二醛GA并搅拌混匀，形成GA修饰的银纳米粒；最后加入P-糖蛋白抗体并搅拌混匀，离心后收集底部沉淀重新悬浮于PBS，即得SERS免疫探针并置于冰箱保存待用；所述的硅包裹的Fe₃O₄捕获磁珠MB@SiO₂的制备方法为：取Fe₃O₄磁珠，加入TEOS混合产生硅壳，磁铁沉淀后重悬于乙醇；再加入戊二醛GA并搅拌混匀，形成GA修饰的银磁珠；最后加入CD45抗体形成连接，磁铁收集底部沉淀重新悬浮于PBS溶液，即得捕获磁珠并置于冰箱保存待用。

4.根据权利要求3所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒，其特征在于：所述的硅包银胶的SERS探针Ag@SiO₂和硅包裹的Fe₃O₄捕获磁珠MB@SiO₂的制备中重新悬浮于的PBS中含0.5％BSA。

5.根据权利要求1所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒在多药耐药蛋白检测中的应用。

6.根据权利要求5所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒在多药耐药蛋白检测中的应用，其特征在于：硅包银胶的SERS探针、硅包裹Fe₃O₄的捕获磁珠与靶细胞一起组成SERS探针-细胞-磁珠“三明治”结构。

7.根据权利要求5或6所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒在多药耐药蛋白检测中的应用，其特征在于：SERS检测方法为：取SERS探针和捕获磁珠，与含有P-糖蛋白表达的靶细胞样品或血液样本混合，磁铁分离沉淀出SERS探针-细胞-磁珠“三明治”复合物，重新悬浮于PBS后制备载玻片样品进行SERS检测。

8.根据权利要求7所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒在多药耐药蛋白检测中的应用，其特征在于：该应用方法使用P-糖蛋白抗体试剂检测不同浓度耐药细胞和不同比例耐药细胞与敏感细胞混合,以及人外周血样本中P-糖蛋白的含量。

9.根据权利要求7所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒在多药耐药蛋白检测中的应用，其特征在于：该应用方法线性检测范围为5x10⁵-50per/mL，检出限为50per/mL。

10.根据权利要求7所述的一种SERS技术检测多药耐药蛋白的试剂盒在多药耐药蛋白检测中的应用，其特征在于：该应用方法中SERS技术检测结果为1078cm^-1和1580cm^-1波段时的峰值。