[发明专利]一种北京花楸组织培养方法

说明书

本发明涉及植物组织培养技术领域，尤其涉及了一种北京花楸的组织培养快速繁殖育苗方法，本方法是由无菌苗获得：鲜嫩带芽茎段经过处理接于初始培养基上进行培养，得到脱毒带芽茎段；增殖培养：将脱毒带芽茎段接于含有MS+1.25mg/L 6‑BA+0.25mg/L NAA+0.25mg/L IBA+30g/L蔗糖+6.5～7g/L琼脂粉的增殖培养基上进行培养，得到继代苗；生根培养：将继代苗转入含有MS+1.25mg/L IBA+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+6.5～7g/L琼脂的生根培养基上培养，得到生根苗；炼苗和移栽：将盛根苗移至温室中进行炼苗，炼苗后进行移栽。采用本发明方法，可使北京花楸增殖效率提高至26.5，生根率达93.3％，炼苗成活率100％，利于北京花揪量化生产。

技术领域

本发明涉及一种木本植物组织培养繁殖方法，尤其涉及一种北京花楸组织培养快速繁殖的方法，属木本植物组织培养育苗技术领域。

背景技术

北京花楸(Sorbus discolor)是我国蔷薇科(Rosaceae)花楸属(Sorbus L.)植物中的特有乔木树种之一，其叶色随季节多变、果白色或黄色，抗逆性强，不仅极具园林观赏价值和药用价值(辛宝英，2013；李法曾等，2016)，而且是花楸属种质创新的重要亲本(汤薇等，2016)。由于北京花楸实生育苗，后代变异较大；扦插无性繁殖时成生根率低，大量繁殖较为困难，致使推广应用受很大影响，组织培养育苗技术是解决该树种快繁难题的关键。

近年来，基于花楸属植物难繁但市场有较大需求，一些学者对花楸属或同科异属的其他物种开展了较多的组织培养工作。相关研究表明，核心培养基多以MS培养基为主，激素以6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)为主，辅以吲哚乙酸(IBA)、萘乙酸(NAA)等。目前，仅部分研究成效较好，如百花花楸(或称为花楸树，S.pohuashanensis)，其增殖系数为4.5，生根率80％(白卉等，2007)；詹立平等(2012)针对西伯利亚花楸(S.sibirica)也进行了组培快繁的研究，其丛生芽诱导率和增殖倍数分别为100％和13.6±2.3，其最佳生根率为82.6％，但以上研究树种不同，其二者采用的组培方法体系各异。北京花楸的生物学特性和繁殖特性均不同于同属的其它树种，如花楸树(王爱芝等，2005；郭艳茹等，2007)、西伯利亚花楸(高英凯等，2016)、天山花楸(S.tianshania)(冯怀章等，2011)、水榆花楸(S.alnifolia)(常苹，2013)，以及引进的同属一些列欧洲、美洲花楸(sorbus sp.)等(韩焱，2005；陈士刚等，2010；王丹等，2012)，也与引种美洲异属同科的腺肋花楸属灌木树种不同，如黑果腺肋花楸(Aronia×prunifolia)、红果腺肋花楸(A.arbutifolia)等(王晓明等，2007；高晔华等，2013)。因此，上述与北京花楸亲缘关系或近或远的物种及品种，虽然其具有了初步的组织培养快繁技术体系，但是均无法将上述技术方法直接应用于北京花楸。

可能由于北京花楸繁殖较难等技术难题，目前仅辛宝英(2013)初步对北京花楸“微型繁殖技术”进行了开拓性的有益探索，但其研究表明，采用相关技术，最理想状况下侧芽诱导率仅为76.41％、生根率仅为86.71％，而且繁殖系数不清、缺乏炼苗相关技术；另外，在其处理外植体的过程中，自来水冲洗过程仅10min，时间过短，冲洗不彻底，且使用HgCl₂进行消毒，不仅易引起无菌苗褐化，而且易给试验人员造成健康危害、给环境造成污染。北京花楸的快繁研究工作还仅为初步的，尚未从实验室走向生产。

因此,十分必要研发一种北京花楸的高效组织培养育苗技术方法，促进北京花楸的工厂化、规模化快速生产，提高推广应用面积，获得更大的社会、经济和生态效益。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明要解决的问题是提供一种高效、安全的北京花楸组织培养方法，步骤如下：

(1)无菌苗获得：鲜嫩带芽茎段经过处理和杀菌处理，接于初始培养基上培养30d，所述初始培养基配方为MS+30g/L蔗糖+6.5g/L琼脂粉；