[发明专利]一种核酸释放剂及快速释放核酸的方法及其应用

说明书

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种核酸释放剂及快速释放核酸的方法及其应用。本发明的核酸释放剂由5～500mM Tris‑HCl,50～1000mM NaCl，0.1～10mM EDTA、质量/体积比为0.01％～2％的SDS、质量/体积比为0.04％～3％的LLS和质量/体积比0.01％～2％的甜菜碱组成。本发明的核酸释放方法能够快速释放血清、血浆、尿液、唾液、口腔拭子、干血斑斑、法医学样品及环境样品中的核酸，释放的核酸可用于检测、克隆、序列分析、分子杂交等下游实验。

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种核酸释放剂及快速释放核酸的方法及其应用。

背景技术

目前，不同类型基因检测均会涉及到核酸的提取和纯化步骤。核酸提取纯化一般经历过液体法-离心柱法-磁珠法，液体法和离心柱法均会涉及到有毒有机物的使用，对环境和实验操作者均存在一定的危害。而磁珠法需要相应特殊配制的磁珠缓冲液和特异修饰后的磁珠，从成本和操作方面来分析，均存在成本高且操作步骤繁琐，同时，也限制了自动化的进程和应用的推广。因此，开发一种能快速释放核酸并且对后续基因检测实验无影响核酸快速释放方法成为目前亟待解决的问题。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供一种核酸释放剂及快速释放核酸的方法及其应用，目的是大大缩短核酸提取纯时间化、降低制造成本，同时具有操作简单的优势。

本发明的核酸释放剂由5～500mM Tris-HCl,、50～1000mM NaCl，0.1～10mMEDTA、质量/体积比为0.01％～2％的十二烷基磺酸钠(SDS)、质量/体积比为0.04％～3％的十二烷基硫酸锂(LLS)和质量/体积比0.01％～2％的甜菜碱组成，所述的体积百分比是以无菌水为基准。

其中，所述的Tris-HCl的pH7.0～9.0。

本发明的快速释放核酸的方法按照以下步骤进行：

(1)根据需要释放核酸的样本类型的不同，用超纯水对样本进行5～100倍稀释，再加入核酸释放剂，样本与核酸释放剂的比例任意，较优选的体积比为：核酸释放剂/待处理样本＝1/10～1/100；

(2)加入核酸释放剂后涡旋震荡混匀，加热孵育，优选的加热温度为80～100℃，孵育时间优选5～30min，核酸即得到有效释放。

本发明的快速释放核酸的方法用于快速释放血清、血浆、尿液、唾液、口腔拭子、干血斑斑、法医学样品及环境样品中的核酸，释放的核酸用于检测、克隆、序列分析、分子杂交等下游实验。

与现有技术相比，本发明的特点和有益效果是：

本发明的核酸释放剂同时能抑制DNase和RNase活性，并且对后续实验无影响；

本发明的核酸释放剂采用强烈的蛋白变性剂，能够快速破解细胞、病毒的等蛋白结构，释放出核酸；同时加热处理，可以完全抑制Dnase和Rnase活性；

本发明的核酸释放剂中有强烈核酸保护剂，能够避免核酸在高温下降解；

本发明的核酸释放方法，能够快速释放血清、血浆、尿液、唾液、口腔拭子、干血斑斑、法医学样品及环境样品中的核酸，释放的核酸可用于检测、克隆、序列分析、分子杂交等下游实验。

本发明之核酸释放方法，无需特殊的试剂，试剂成本低下，操作流程简单，可推广性强。

附图说明

图1为本发明实施例快速释放核酸的方法检测EXOC1基因单核苷酸多态性；

图2为本发明实施例快速释放核酸的方法检测CNTN4基因单核苷酸多态性；

图3为本发明实施例快速释放核酸的方法检测RNF146基因单核苷酸多态性；