[发明专利]T细胞受体基因修饰小鼠

权利要求书

1.一种制备啮齿动物细胞的方法，其包括在内源性T细胞受体(TCR)α基因座上进行以下取代：

(I)用功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段取代内源性TCR Vα基因区段，以及

(II)用功能性未经重排的人源TCR Jα基因区段取代内源性TCR Jα基因区段，

从而使得所述功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段和所述功能性未经重排的人源TCR Jα基因区段：

(i)彼此之间可操作地连接且与内源性TCR Cα基因序列可操作地连接，且

(ii)在T细胞内重排使得所述内源性TCRα基因座编码功能性嵌合TCRα多肽，所述功能性嵌合TCRα多肽包含与内源性TCR Cα结构域可操作地连接的人源或人源化的TCRα可变结构域。

2.根据权利要求1所述的方法，其中，

(I)所有内源性TCR Vα基因区段均被所述功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段取代，和

(II)所有内源性TCR Jα基因区段均被所述功能性未经重排的人源TCR Jα基因区段取代。

3.根据权利要求2所述的方法，其中，

(I)所述功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段包括未经重排的人源TRAV40基因区段、未经重排的人源TRAV41基因区段、未经重排的人源TRAV39基因区段、未经重排的人源TRAV35基因区段、未经重排的人源TRAV34基因区段、未经重排的人源TRAV22基因区段、未经重排的人源TRAV21基因区段、未经重排的人源TRAV13-2基因区段、未经重排的人源TRAV8.5基因区段、未经重排的人源TRAV6基因区段、未经重排的人源TRAV5基因区段，和/或未经重排的人源TRAV1-1基因区段，和

(II)所述功能性未经重排的人源TCR Jα基因区段包括所有功能性未经重排的人源TCRJα基因区段。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段和所述未经重排的人源TCR Jα基因区段被TCRδ基因座分隔。

5.根据权利要求4所述的方法，其中所述TCRδ基因座包含：

(I)功能性未经重排的人源TCR Vδ基因区段，

(II)功能性未经重排的人源TCR Dδ基因区段，和

(III)功能性未经重排的人源TCR Jδ基因区段，

其中所述功能性未经重排的人源TCR Vδ基因区段、所述功能性未经重排的人源TCR Dδ基因区段和所述功能性未经重排的人源TCR Jδ基因区段彼此之间以及与TCR Cδ基因序列可操作地连接。

6.根据权利要求5所述的方法，其中所述TCR Cδ基因序列是人源TCR Cδ基因序列。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述取代包括在内源性TCRα基因座中插入在所述功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段的下游的重组位点。

8.根据权利要求7所述的方法，其中在所述功能性未经重排的人源TCR Vα基因区段的下游的所述重组位点在所述功能性未经重排的人源TCR Jα基因区段的上游。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述的取代包括将至少以下一个插入内源性TCRα基因座：

(i)重组的AsiSI限制酶切位点，

(ii)重组的AscI限制酶切位点，

(iii)SEQ NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12，和/或SEQ ID NO：13所示的核酸序列，以及

(iv)选择性表达盒。