[发明专利]一种紫杉醇/DNA四面体载药体系及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种紫杉醇/DNA四面体载药体系及其制备方法。

背景技术

紫杉醇(缩写为PTX)是目前唯一一种可以促进微管聚合和稳定已聚合微管的抗肿瘤药物。肿瘤细胞接触到紫杉醇后会在细胞内聚集大量微管，这些微管的积累干扰了细胞的各种功能，特别是使细胞分裂停止于有丝分裂期，从而阻断细胞的正常分裂。

PTX自发现以来得到了广泛的应用，但是目前PTX的应用面临三大问题：一、难溶于水，现在临床上用到的紫杉醇的溶媒是聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇的混合物，而聚氧乙烯蓖麻油有可能导致患者严重的过敏反应；二、资源极为有限，它的自然资源：红豆杉和东非罗汉松，都生长得非常缓慢，数量有限且其中有效成分的含量非常低，价格十分昂贵；三、耐药性的出现也大大降低其化疗效果。

针对缓解上述问题的研究成为热点，DNA四面体(缩写为TDNs)是由四条链组成的三维DNA纳米结构，合成方法简单，产率高，对特异性和非特异性核酸酶的耐受性均比普通的线性DNA要好，具有良好的生物相容性和生物可降解性，能够直接进入活细胞而不需要转染试剂的辅助，在细胞内能保持较长时间的结构完整性，其在载药方面受到了广泛关注。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫杉醇/DNA四面体载药体系及其制备方法，以解决现有紫杉醇难溶于水、对癌细胞杀伤效果不佳以及耐药性的问题。

本发明解决上述技术问题的技术方案如下：

一种紫杉醇/DNA四面体载药体系的制备方法，将紫杉醇溶液与DNA四面体溶液混合，孵育后离心，去上清液，制得紫杉醇/DNA四面体载药体系。

本发明将紫杉醇(PTX)与DNA四面体(TDNs)相结合，利用TDNs的生物相容性和生物可降解性提高了紫杉醇的水溶性、逆转其耐药性，降低了紫杉醇溶媒聚氧乙烯蓖麻油和无水乙醇混合物的过敏反应，进而提高了紫杉醇对癌细胞的杀伤力。本发明以TDNs为紫杉醇的载体，其合成方法简单、产率高，疗效显著。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述紫杉醇溶液与DNA四面体溶液的体积比为(8-10)：(2-3)，其中，紫杉醇溶液的浓度为60-100μM，DNA四面体溶液的浓度为150-250nM。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述制备方法还包括：配置上述紫杉醇溶液，将紫杉醇溶于二甲(基)亚砜中配置成0.8-1.2mM的储存液，将储存液稀释成浓度为60-100μM的紫杉醇溶液。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述制备方法还包括：制备上述DNA四面体溶液，将4条DNA单链以相同浓度加入至TM缓冲液中，混匀后置于PCR仪内，将温度升至95℃稳定10min后，再冷却至4℃稳定20min，得到DNA四面体溶液。

4条DNA单链序列分别为:

S1:

5'-ATTTATCACCCGCCATAGTAGACGTATCACCAGGCAGTTGAGACGAACATTCCTAAGTCTGAA-3'(SEQ ID NO:1)；

S2:

5'-ACATGCGAGGGTCCAATACCGACGATTACAGCTTGCTACACGATTCAGACTTAGGAATGTTCG-3'(SEQ ID NO:2)；

S3:

5'-ACTACTATGGCGGGTGATAAAACGTGTAGCAAGCTGTAATCGACGGGAAGAGCATGCCCATCC-3'(SEQ ID NO:3)；

S4:

5'-ACGGTATTGGACCCTCGCATGACTCAACTGCCTGGTGATACGAGGATGGGCATGCTCTTCCCG-3'(SEQ ID NO:4)。进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述TM缓冲液为10mM Tris-HCl，50mM MgCl₂，pH＝8.0。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，孵育的具体过程为：在室温下，于300-420rpm/min的振动条件下孵育19-21h。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，离心的具体过程为：在9000-11000rpm/min的转速下离心8-12min。

进一步地，在本发明较佳的实施例中，上述制备方法还包括：检测由浓度为60-100μM的紫杉醇溶液制得的紫杉醇/DNA四面体溶液中紫杉醇的含量，计算出DNA四面体溶液达到饱和时对应紫杉醇溶液的最低浓度。

上述的制备方法制备得到的紫杉醇/DNA四面体载药体系。