[发明专利]一种蛋白芯片检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物检测技术领域，具体涉及一种蛋白芯片检测试剂盒。

背景技术

蛋白芯片是一种高通量的检测技术，是近年发展起来的生物检测技术。利用这项技术，通过将大量抗体密集地点制在固相载体上，可同时检测多种蛋白质的量变。该技术效率高且样本需求量小。蛋白芯片检测技术流程中较为重要的一步就是样品与芯片的杂交反应，其对蛋白芯片的检测结果影响重大，主要体现在芯片背景、信号检出率、信号强度、信号均一性等方面。

目前，国内外蛋白芯片公司大多拥有适用于本公司生产的蛋白芯片的专门的检测试剂盒，但其试剂盒具有价格高昂、成分不公开、不适合其他类型的表面化学修饰片基制备的蛋白芯片的检测，具体表现为检测信号低等缺点。而传统的芯片杂交试剂，比如包含不同比例的吐温、脱脂奶粉或BSA的杂交缓冲液则具有芯片背景高和信号检出率低等缺点。因此，开发一种检出信号强的、成本低的、适用性广的蛋白芯片检测试剂盒是非常有必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种蛋白芯片检测试剂盒，具有操作简便、信号强度高、信号检出率高、背景低、适用于多种片基等优点。能够弥补现有蛋白芯片检测试剂检测信号低、适用的片基类型少等不足之处，满足蛋白芯片检测需要，对蛋白芯片的发展和推广具有重要价值。

为了解决上述问题，本发明所采用的技术方案是：一种蛋白芯片检测试剂盒，由以下组分组成：

A、杂交液：10-50mM氯化钠，100-500mM甘氨酸，1-10mM磷酸二氢钾，1-10mM磷酸氢二钠，10-200mM蔗糖，1-30mM乙二胺四乙酸，0.01-2％吐温-20；

B、封闭液：50-200mM磷酸盐缓冲液，0.01-2％吐温-20；

C、清洗液：50-200mM磷酸盐缓冲液，0.01-2％吐温-20；

D、脱脂奶粉。

以上杂交液A和封闭液B在使用前需加入1-10％脱脂奶粉。以上杂交液、封闭液和清洗液pH为5.0-9.0。

本发明提供的蛋白芯片检测试剂盒适用于直接标记待测物的方法或者双抗夹心法(先用待测物与芯片杂交，再用标记的二抗与芯片杂交)等各种方法检测蛋白芯片。具有简便快速、信号检出强、信号检出率高、背景低、成本低、适用于多种片基的特点，在蛋白芯片检测方面具有显著优势。

具体实施方式

下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规条件，如《精编分子生物学实验指南》(F.M.奥斯伯,R.E.金斯顿,J.G.塞德曼等主编，马学军，舒跃龙等译校。北京：科学出版社，2004)中所述的方法进行，或按照执照厂商建议的条件进行。

实施例1蛋白芯片检测试剂盒制备过程

A、杂交液：0.75g氯化钠，30g甘氨酸，0.23g磷酸二氢钾，0.47g磷酸氢二钠，10.00g蔗糖，10ml 2％的乙二胺四乙酸，500ul吐温-20，加去离子水定容至1000ml，调节pH至7.0，使用前取适量加入3％脱脂奶粉混匀。

B、封闭液：0.01M磷酸盐缓冲液中加入0.05％吐温-20制成，具体方法为：称取8.00g氯化钠，0.2g氯化钾，1.44g磷酸氢二钠，0.24g磷酸氢二钾，500ul吐温-20，定容至1000ml，使用前加入3％脱脂奶粉混匀。

C、清洗液：0.01M磷酸盐缓冲液中加入0.05％吐温-20制成，具体方法为：称取80.00g氯化钠，2.00g氯化钾，14.40g磷酸氢二钠，2.40g磷酸氢二钾，5ml吐温-20，定容至1000ml配制成10×清洗液，使用前用去离子水将10×清洗液稀释成1×。

D、脱脂奶粉：购买自美国Signature Kitchens。

实施例2使用本发明试剂盒对细胞裂解液与蛋白芯片的反应进行检测

(1)蛋白芯片制备：使用sciFLEXARRAYER S1芯片点样仪将21种抗体(购自immunoway)，2种阳参(biotin-anti-Mouse)点制芯片，芯片片基使用3种不同的表面化学修饰，分别为烷硅化修饰片基和亲水多聚物修饰片基，购自德国SCHOTT公司、醛基化修饰片基，购自北京博奥生物。每种抗体点制4重复，每种阳参点制2个4重复(分别位于芯片反应区域的左上方和右下方)构成一个独立反应区。抗体排布如表1。抗体对应的蛋白名称如表2。

表1.一个独立反应区抗体排布。