[发明专利]一种用于提取大豆种子基因组DNA的细胞裂解液及其提取方法

说明书

本发明涉及一种用于提取大豆种子基因组DNA的细胞裂解液，所述细胞裂解液为含有0.015~0.025g/ml的SDS，0.04~0.06mol/L的Tris‑HCl，0.04~0.06mol/L的EDTA，以及0.14~0.16mol/L的NaCl的纯水溶液，所述细胞裂解液的pH值为8；本发明还涉及采用该细胞裂解液的大豆种子基因组DNA的提取方法；发明人发现采用本发明特定配方的细胞裂解液特别适合大豆种子基因组DNA提取，能够提高大豆种子基因组DNA的得率和纯度。

技术领域

本发明涉及一种用于提取大豆种子基因组DNA的细胞裂解液及其提取方法，属于分子生物学领域。

背景技术

大豆（Glycine max），豆科大豆属一年生草本植物，起源于我国，富含蛋白质、脂肪、碳水化合物、纤维素、矿物质和维生素等，其中蛋白含量高达40%左右，富含8种必需氨基酸，是人体植物蛋白的理想摄入源，大豆油脂含量在20%左右，不饱和度较高，是典型的亚油酸类健康油脂，大豆中亦含有多种具有特殊功效的营养因子如酚类、维生素E、多肽、皂苷和低聚糖等。

大豆是我国居民蛋白摄入的重要来源，1995年以前我国还是大豆的净出口国，但之后随着国内大豆需求激增以及其它国家转基因大豆的大面积商业化种植，国内大豆进口开始逐年增加。2016年我国大豆进口8900万吨，自产1290万吨，进口量约是自产量的7倍。我国进口大豆主要来源于美国、巴西和阿根廷等这些转基因大豆种植大国，2016年全球共种植大豆3387万公顷，其中具有除草剂抗性的转基因大豆播种面积已占到94%，且草甘膦钾盐和草甘膦异丙胺盐的喷洒占全部除草剂的85%，因此进口至我国的大豆多具有转基因（抗草甘膦）特性。但，同时我国农业部规定批准进口至我国的转基因大豆只能用作加工原料，禁止在国内种植。

在该背景下，基于对我国粮食安全及生物多样性的保护，研发并掌握可靠、准确的大豆转基因检测技术显得尤为重要，而以定性或定量PCR为基础的转基因检测技术的顺利完成则需要理想的DNA模板。

目前提取基因组DNA几个主要方法包括SDS方法、CTAB和试剂盒法等，然而，由于大豆中高含量的蛋白质、脂肪等成分均会不同程度的影响基因组DNA的提取，这些成分不能有效去除将直接干扰终产物DNA的浓度和纯度。

因此，具体选择哪种方法，以及在使用的试剂和操作方法的优化使得能够更好地适用于大豆基因组DNA的提取，是本领域技术人员亟待解决的技术问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明一方面提供一种用于提取大豆种子基因组DNA的细胞裂解液，其中，所述细胞裂解液为含有0.015~0.025g/ml的SDS，0.04~0.06mol/L的Tris-HCl，0.04~0.06mol/L的EDTA，以及0.14~0.16mol/L的NaCl的纯水溶液；所述细胞裂解液的pH值为8。

优选的，所述细胞裂解液为含有0.02g/ml的SDS，0.05mol/L的Tris-HCl，0.05mol/L的EDTA，以及0.15mol/L的NaCl的纯水溶液，所述细胞裂解液的pH值为8。

本发明另一方面提供了一种大豆种子基因组DNA的提取方法，所述提取方法包括细胞裂解过程以及纯化DNA的过程，其中，所述细胞裂解过程采用如上述的细胞裂解液。

优选的，所述细胞裂解过程为：将获取的大豆种子细粉与所述细胞裂解液混匀，其中，每1ml细胞裂解液混合0.08~0.1g大豆种子细粉，然后置于55~65℃水浴至少60分钟，然后离心取上清液。

优选的，所述大豆种子细粉为通过80目筛的细粉。

优选的，所述的纯化DNA的过程包括以下步骤：

步骤1，取所述细胞裂解获得的上清液，向其中加入等体积的氯仿和异戊醇的混合液，所述氯仿和异戊醇的混合液中氯仿与异戊醇的体积比为24:1，充分混匀后离心取上清液；