[发明专利]一种粘多糖检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种粘多糖检测试剂盒，其包括显色板、显色液、洗脱液，所述显色板包括底板托架和点样滤纸，点样滤纸上设置有标品对照区和样品检测区，所述显色液是溶解有阿里新蓝的醋酸水溶液或溶解有1,9‑二甲基亚加蓝的甲酸‑Tris水溶液，其中显色液是溶解有阿里新蓝的醋酸水溶液时，洗脱液是质量分数为8％～15％的醋酸水溶液；显色液是溶解有1,9‑二甲基亚加蓝的甲酸水溶液时，洗脱液是50mmol/L甲酸水溶液与无水乙醇体积比为75:25～65:35的混合液。本发明粘多糖检测试剂盒结构简单，具有良好的特异性，能够定量的测定尿液中粘多糖含量，且检测灵敏度和效率高、鉴定结果准确、操作简单、检测成本低，为粘多糖病提供了一种快速简便的检测方法。

技术领域

本发明属于生物化学检测技术领域，具体涉及一种粘多糖检测的试剂盒。

背景技术

粘多糖病因蛋白聚糖降解酶先天性缺陷所引起的蛋白聚糖分解障碍。其特征是过多的寡聚糖堆积与排泄，造成骨骼发育障碍、肝脾肿大、智力迟钝和尿中粘多糖类排出增多。粘多糖是含氮的不均一多糖，是构成细胞间结缔组织的主要成分，也广泛存在于哺乳动物各种细胞内，其化学组成为糖醛酸和酪氨基己糖交替出现，有时含硫键，也称为糖胺聚糖。

目前粘多糖检测方法主要有：(1)比色法：DMB-Tris比色法、阿利新蓝比色法等；(2)电泳法：琼脂糖凝胶电泳、醋酸纤维电泳法SDS-PAGE等。这些方法存在很多的弊端，如比色法不能直接定量，准确度比较差，电泳法操作过程复杂，需要仪器，不能定量，成本比较高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种能够快速简单并且准确的检测粘多糖含量的试剂盒。

解决上述技术问题所采用的粘多糖检测试剂盒包括显色板、显色液、洗脱液，所述显色板包括底板托架和点样滤纸，点样滤纸上设置有标品对照区和样品检测区，所述显色液是溶解有阿里新蓝的醋酸水溶液或溶解有1,9-二甲基亚加蓝的甲酸-Tris水溶液；其中显色液是溶解有阿里新蓝的醋酸水溶液时，洗脱液是质量分数为8％～15％的醋酸水溶液；显色液是溶解有1,9-二甲基亚加蓝的甲酸-Tris水溶液时，洗脱液是50mmol/L甲酸水溶液与无水乙醇体积比为75:25～65:35的混合液。

上述的标品对照区的制备方法为：将硫酸软骨素(Chondroltln sulfate sodlumsalt from shark cartllage)标准品加入去离子水中，分别配制不同浓度的硫酸软骨素标准品溶液，取2～10μL不同浓度的硫酸软骨素标准品溶液均匀滴加到点样滤纸的不同区域上，自然晾干或吹风机吹干；然后在每一个滴加硫酸软骨素标准品溶液的区域滴加显色液，反应1分钟，甩掉显色液，用洗脱液洗涤后自然晾干或用吹风机吹干，即制备成标品对照区。

上述溶解有阿里新蓝的醋酸水溶液中阿里新蓝(Alcian blue 8GX)的浓度为0.9～1.8mg/mL、醋酸的质量分数为2％～3％；溶解有1,9-二甲基亚加蓝的甲酸-Tris水溶液的pH＝8.8～9.5，其中1,9-二甲基亚加蓝(1,9-Dimethyl-Methylene Blue zinc)的浓度为0.8～2.5mg/mL、甲酸的浓度为50mmol/L、Tris的浓度为0.2mol/L。

上述标品对照区的制备方法中，优选分别配制硫酸软骨素浓度为2μg/μL、1μg/μL、0.5μg/μL、0.25μg/μL、0.10μg/μL、0.05μg/μL、0μg/μL的硫酸软骨素标准品溶液，然后取2～10μL不同浓度的硫酸软骨素标准品溶液，按照浓度从高到低或者从低到高的顺序依次均匀滴加到点样滤纸的不同区域上。

上述的点样滤纸为吸附性好的滤纸，其四周通过夹子固定在底板托架上。

上述点样滤纸的样品检测区设置有1～7个点样区域。

本发明的试剂盒还包含有洗脱槽。