[发明专利]一种辣木叶提取物的提取方法

权利要求书

1.一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，采用植物水解酶酶解、碱法提取联合蛋白酶酶解、超滤处理、乙酸乙酯萃取去杂、分级醇沉以及大孔树脂富集处理工艺进行联合提取，具体包括如下步骤：

（1）植物水解酶酶解：将新鲜辣木叶烘干后粉碎，过筛，得到辣木叶粉，加入去离子水，高速剪切后，调节pH值，加入植物水解酶酶解，得到混悬液；所述辣木叶粉与去离子水的料液比为1:10~12 g/mL；所述高速剪切是在6000~8000 rpm的速率下剪切10~20分钟；所述调节pH值是调节pH值为4.4~5.0；所述植物水解酶的加入量为辣木叶质量的2~4%；所述植物水解酶为产品型号Viscozyme L的复合植物水解酶；所述植物水解酶酶解是在50~56℃温度条件下酶解4~6小时；

（2）碱法提取联合蛋白酶酶解：调节混悬液pH值，匀速搅拌后，再次调节混悬液的pH值，加入蛋白酶进行酶解，灭酶，离心分离，得上清液；所述蛋白酶的加入量为辣木叶质量的3~5%；所述蛋白酶为胰酶和碱性蛋白酶，胰酶的加入量占总酶量的20~40%，碱性蛋白酶的加入量占总酶量的60~80%；

（3）超滤处理：采用超滤方法处理上清液，收集透过液；

（4）乙酸乙酯萃取去杂：将步骤（3）得到的透过液进行真空浓缩后，加入乙酸乙酯，匀速搅拌，离心分离，收集水相；

（5）分级醇沉：将步骤（4）得到的水相进行真空浓缩去除残留的乙酸乙酯后，加入预冷的无水乙醇，匀速搅拌后，离心，在得到的沉淀物中加入去离子水溶解后，冷冻干燥，得到粉末；所述真空浓缩均为浓缩至固形物含量为30~40%；所述预冷的无水乙醇为预冷至4~8℃的无水乙醇；预冷的无水乙醇的加入量为使体系中乙醇含量达到10~20wt%；所述匀速搅拌为室温下200~400 r/min转速搅拌3~5h；所述离心为4000~6000g离心20~30min；在得到的沉淀物中，加入去离子水的量为沉淀物湿重的6~8倍；

（6）大孔树脂富集：将步骤（5）得到的粉末溶于水中，过大孔树脂柱，采用乙醇溶液梯度洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，得到辣木叶提取物；辣木叶提取物中，蛋白含量70%，总糖含量20%，水分含量8%，ORAC值1500 μmol Trolox equiv/g，DPPH值600 μmol Troloxequiv/g。

2.根据权利要求1所述的一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，步骤（1）中，所述过筛是过60目筛。

3.根据权利要求1所述的一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述调节混悬液pH值是调节pH值为8.0~9.0；所述匀速搅拌为室温下400~600 r/min转速搅拌2~4h；所述再次调节混悬液的pH值是调节pH值为7.0~9.0；所述蛋白酶酶解是在50~56℃温度条件下酶解6~8小时；所述灭酶是在90~96℃灭酶20-30 min；所述离心分离是4000~6000g离心20~30min。

4.根据权利要求1所述的一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，步骤（2）中，所述碱性蛋白酶包括型号为NS37071的蛋白酶。

5.根据权利要求1所述的一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，步骤（3）中，所述超滤处理的条件为：采用截留分子量10 kDa的超滤膜，超滤压力0.1~0.3MPa。

6.根据权利要求1所述的一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，步骤（4）中，所述真空浓缩为浓缩至固形物含量为20~30%；所述乙酸乙酯的加入量为真空浓缩液体积的1~2倍；所述匀速搅拌为室温下600~800 r/min转速搅拌1~2h；所述离心分离是4000~6000g离心20~30min。

7.根据权利要求1所述的一种辣木叶提取物的提取方法，其特征在于，步骤（6）中，所述粉末溶于水后的浓度为200~400 mg/mL；所述大孔树脂为三菱化学大孔树脂SP-207；所述梯度洗脱为采用0~40 vol%乙醇溶液梯度洗脱，具体为：1-2个柱体积采用100vol%水洗脱，3-5个柱体积采用100~60 vol%水、0~40 vol% 乙醇洗脱，6-7个柱体积采用60 vol%水、40 vol%乙醇洗脱，收集40 vol%乙醇洗脱液。