[发明专利]叶酸检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域：

本发明涉及医学免疫学中荧光免疫层析技术领域，具体地说是一种能够快速准确的对叶酸进行定量分析的叶酸检测试剂盒及其制备方法。

背景技术：

叶酸是由喋呤啶，对氨基苯甲酸和谷氨酸等组成的化合物。存在于自然界的叶酸有二氢叶酸和四氢叶酸两种形式。而在人体中只有四氢叶酸才具有生理功能。四氢叶酸是一碳单位的传递体，而一碳单位是指在人体新陈代谢过程中含有一个碳原子的基团，例如甲基，羟甲基等。正是这些活跃的一碳单位四氢叶酸，参与了许多化合物的生成和代谢。叶酸是各种酶中最活跃的基团，它几乎参与了所有生命的生化代谢过程：1.对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质的合成起重要作用；2.对巨大红芽球性贫血和口炎性腹泻有疗效；3.抗肿瘤作用；4.对婴幼儿的神经细胞与脑细胞发育有促进作用；5.其他作用，可作为精神分裂病人的辅助治疗剂，可用于慢性萎缩性胃炎、抑制支器官鳞状转化以及防治因高同型半胱氨酸血症引起的冠状动脉粥样硬化、心肌损伤、心肌梗塞等。

叶酸缺乏的危害：引起巨幼红细胞血症；皮肤病变：牛皮癣、疮疹状皮炎、酒渣鼻、湿疹、剥脱性皮炎等；产科的障碍：孕妇体内叶酸缺乏是神经管畸形发生的主要病因。此外，还可导致眼、口唇、腭、胃肠道、主动脉、肾、骨胳等器官的畸形发生率增加。此外还发现，孕妇缺乏叶酸与胎盘早剥、自发性流产、先兆子痫、胎儿发育不良和低出生体重等到疾病有关；神经病变与精神障碍：叶酸的缺乏会显示精神病症候群，人会有情绪低落等现象。

叶酸补充过量的危害：摄入叶酸过多能导致出现老年痴呆：是最近美国若施大学医学中心的玛塔·毛里斯博士通过研究发现的，这一结论让欧洲关于是否要在食品中添加叶酸的讨论进一步升温；孕妇过量服用叶酸增加患乳腺癌的几率大剂量服用叶酸可降低血清中维生素B12的含量；大量叶酸可能导致人类基因改变：来自澳大利亚奥林巴的纽卡斯尔大学的研究人员马克.勒科克以及英国利兹大学的佐薇.耶茨在《遗传学自然评论》上撰文指出，在食物中强化叶酸的做法可能会慢慢地改变人口的基因组成，从而可能导致后代对于一些致命性疾病的抵抗力减弱；叶酸补充过多使人年老时记忆减退。

免疫分析技术是利用微量抗原与相应的高特异性抗体之间的免疫反应，来检测如激素、药物、蛋白质、多肽、酶、肿瘤相关抗原、微生素、病毒、细菌及金属元素等生物体内活性物质。免疫分析技术包括标记免疫分析、非标记免疫分析和仪器免疫分析。本试剂盒利用的含有稀土元素的羧基乳胶微球标记免疫分析技术是属于标记免疫分析之一种。

荧光免疫分析(FIA)和放射免疫分析(RIA)自问世以来，经历了几十年的发展，但是人们越来越感觉到FIA因自然本地太高，干扰检测结果；RIA采用同位素标记，对人体有极大危害并给实验带来不便。酶免疫分析(EIA)也因酶本身不稳定，受其他影响因素较大，推广应用受到限制。80年代初，人们开始研究用稀土元素代替荧光物质和同位素标记蛋白质或抗体，将时间分辨技术引入到生物检测领域，建立了新型的超微量时间分辨荧光免疫分析技术(Timeresolved Fluoroimmunoassay，简称TrFIA)。该技术采用多学科先进技术，集结了其他免疫分析的特点，在免疫学、分子生物学、细胞学和医学等领域，取得长足的发展和广泛应用。

TrFIA利用了具有独特荧光特性的3价稀土离子及螯合物为示踪物代替荧光物质、酶、同位素、化学发光物质，标记抗体、抗原、激素、多肽、蛋白质、核酸探针及生物细胞，待反应体系(如抗原抗体反应、核酸探针杂交、生物素亲和素反应以及靶细胞对效应细胞的杀伤效应等)发生后，用TrFIA检测仪测定反应产物中的荧光强度。根据产物荧光强度和相对荧光强度的比值，判断反应体系中分析物的浓度，从而达到定量分析。在通常的荧光测定中，由于测试样品中含有多种荧光成分，背景荧光(来自样品中的胶体颗粒和溶剂分子引起的散射光以及血清中蛋白质和其他化合物发出的非特异性荧光)强度大、干扰强，成为荧光分析法大范围推广的瓶颈。TrFIA之所以能够成为继EIA、RIA之后一种新的灵敏的检测方法，主要取决于镧系元素独特的荧光特点、检测中采用的波长分辨和时间延迟技术以及解离-增强技术。