[发明专利]一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位、抗体的制备及应用

说明书

技术领域

本发明属于生物技术领域。更具体涉及一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位、抗体的制备及应用。

背景技术

CSF是由CSFV引起的猪的一种高度接触性传染病，给养猪业造成严重的经济损失。CSFV属于黄病毒科、瘟病毒属成员之一。CSFV是有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组大小约12.3kb，仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)。此ORF翻译成含3898个氨基酸残基，分子量约438kDa的多聚蛋白，并进一步在病毒和宿主细胞蛋白酶的作用下加工成结构蛋白和非结构蛋白，其结构蛋白和非结构蛋白在病毒RNA上的编码顺序为Npro、C、Erns(E0)、E1、E2、P7、NS2-3、NS4A、NS4B、NS5A、NS5B。其中，除C、Erns、E1和E2为结构蛋白外.其余均为非结构蛋白。

Erns，是病毒的一种囊膜糖蛋白，也称gp44/48，旧称E0。有9个可能的糖基化位点，去糖基的蛋白骨架分子量约26KDa，由病毒ORF中Glu268-Ala494组成。在感染细胞中Erns在内质网内积累，并可存在于细胞膜表面或被分泌到胞外。在病毒粒子中Erns以97KDa的同源二聚体形式存在于囊膜表面。由于其分子内缺乏疏水的膜锚定区，与病毒囊膜结合力弱，易从囊膜上游离下来。Erns可诱导产生猪瘟的中和抗体，免疫猪可诱导产生对致死量CSFV的保护性免疫。由于编码Erns的核酸序列在属内比编码E2的序列保守程度高，因此Erns可作为防治猪瘟的一种靶蛋白。

在病毒感染过程中，细胞膜上的受体与病毒配体结合是介导病毒侵入宿主细胞的关键因素，也是病毒能否感染细胞的关键。因此，研究病毒受体和病毒配体之间的相互作用成为目前病毒致病机制研究的热点问题之一，因为以其中的任何一个为药物靶点都可以阻断病毒与靶细胞的结合，从而抑制病毒的感染。关于CSFV配体的研究，已证实Erns蛋白参与了病毒的早期吸附，E1和E2蛋白形成的异源二聚体可以介导CSFV侵入宿主细胞，并且此异源二聚体还起到使哺乳动物细胞融合的作用。但是，究竟这三种蛋白的哪些氨基酸序列作为病毒配体与病毒受体结合，目前还没有详细的报道。

发明内容

本发明的目的是在于提供了猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位，所述抗原表位为：编码1D5抗原表位的短肽，序列如SEQ ID NO.1：LATDTEL所示，定位在46-52AA。所述抗原表位可以与CSFV反应，而不与pCold-TF空载体发生反应，也不与Vero细胞发生反应。

本发明还有一个目的是在于提供了一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位在猪瘟病毒抗体药物检测试剂中的应用，该应用使得猪瘟病毒抗体诊断抗原可以用普通化学合成方法制备，相比基因工程表达蛋白做为诊断抗原，合成抗原工艺简便，纯度更高。

本发明的另一个目的是在于提供了一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位模拟肽的制备方法，该方法优点是利用噬菌体随机肽库来筛选猪瘟Erns单克隆抗体1D5识别的表位，可以筛选出与原始序列不同但功能相似的构象表位抗原，即模拟表位抗原。

为了实现上述的目的，本发明通过以下技术措施实现.

一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位的制备方法，其步骤是：

A、利用分子生物学对Erns主要抗原表位区域基因的扩增与重组质粒的构建。

B、将重组蛋白的诱导表达与纯化，

C、利用纯化蛋白进行小鼠免疫，获得杂交瘤细胞和单克隆抗体。

D、单克隆抗体的稳定性和特异性检测。

E、获得上述特异性单克隆抗体的抗原表位，并对其进行鉴定。

一种猪瘟病毒Erns蛋白的抗原表位在制备治疗或预防猪瘟病毒ELSIA抗体药物检测(试剂盒)中的应用，其步骤是：

1、以获得的抗原表位作为参考化学合成抗原。

2、以合成抗原制备试剂盒主要组分抗原包被板。

3、按常规方法制备试剂盒其他组分。

4、使用试剂盒检测血清中狂犬病病毒抗体。

本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：

1、本发明的抗原表位是由针对猪瘟病毒石门株的特定单抗筛选而来，具有极高的特异性和稳定性。

2、与现有的灭活病毒抗原或基因表达抗原技术相比，生产过程中不涉及菌种和毒株，工艺安全有保障，不会对环境造成污染。

3、利用获得的抗原表位合成肽抗原与基因工程表达抗原相比，生产周期短，易纯化且纯度较高。