[发明专利]一种裂解液及其在保存组织或细胞、提取RNA中的应用有效
| 申请号： | 201710848152.0 | 申请日： | 2017-09-19 |
| 公开（公告）号： | CN107475251B | 公开（公告）日： | 2021-02-02 |
| 发明（设计）人： | 赵梓亦 | 申请（专利权）人： | 成都导胜生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10;A01N1/02 |
| 代理公司： | 成都中络智合知识产权代理有限公司 51300 | 代理人： | 喻依丰 |
| 地址： | 610000 四川省成*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 裂解 及其 保存 组织 细胞 提取 rna 中的 应用 | ||
1.裂解液在提取RNA中的应用，其特征在于，提取方法为：
(1)取裂解液A保存的组织或细胞，加入所述裂解液A和裂解液B，颠倒混匀，获得混合物；
(2)从组织中提取RNA时，将步骤(1)得到的混合物进行超声破碎，从细胞中提取RNA时，直接进行下述步骤(4)中的操作；
(3)将超声破碎后的混合物颠倒混匀；
(4)在步骤(3)的混合物中，加入氯仿，混匀后离心，取上层液体；
(5)在步骤(4)获得的上层液体中加入异丙醇，混匀后离心，弃去液体，获得沉淀物；
(6)向上述沉淀物中加入乙醇溶液，混匀后离心，弃去液体；
(7)待步骤(6)中的乙醇挥发后加入ddH2O溶解；
其中，所述裂解液A包括异硫氰酸胍2-4mol/L、氯 化钠5-10mmol/L、氯化钾10-15mmol/L、氯化镁5-10mmol/L；
所述裂解液B包括异硫氰酸胍2-4mol/L、亚精胺1-5mmol/L、水饱和苯酚30-40vt％、硫氰酸铵0.4-0.5mol/L、甘油7- 8vt％，乙酸钠0.1-0.5mol/L，SDS 0.2-0.5wt％，0.01‰的溴酚蓝，裂解液A和裂解液B的pH均为7-7.5。
2.根据权利要求1所述裂解液在提取RNA中的应用，其特征在于，所述步骤(1)中，裂解液A和裂解液B的总质量为组织或细胞质量的100-150倍。
3.根据权利要求1所述裂解液在提取RNA中的应用，其特征在于，所述步骤(2)中，超声功率为100-125W，超声时间为3-6s。
4.根据权利要求1所述裂解液在提取RNA中的应用，其特征在于，所述步骤(4)中，氯仿的体积为混合物体积的0.2-0.3倍。
5.根据权利要求1所述裂解液在提取RNA中的应用，其特征在于，所述步骤(5)中，异丙醇与上层液体的体积比为1：1。
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