[发明专利]一种制备聚羟基脂肪酸酯（PHA）的方法

权利要求书

1.一种制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，该方法包括以下步骤：

(1)制备嗜盐菌发酵液并通过固液分离得到浓缩菌液；

(2)对步骤(1)得到的浓缩菌液进行洗涤；

(3)对步骤(2)得到的洗涤后的菌液进行细胞壁破壁裂解以得到破壁液；

(4)去除步骤(3)得到的破壁液中的非PHA物质，收集PHA；

(5)纯化PHA；

(6)干燥PHA。

2.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，所述PHA选自聚羟基丁酸(PHB)、聚3-羟基丁酸和3-羟基戊酸共聚酯(PHBV)、聚3-羟基丁酸和4-羟基丁酸共聚酯(P3HB4HB)。

3.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(1)中所述的嗜盐菌选自嗜盐古菌(halobacteriaceae)和盐单胞菌(halomonadaceae)；和/或，步骤(1)中，所述固液分离采用离心法或者过滤法，或者絮凝法，优选的是离心法。

4.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(2)中，浓缩菌液的洗涤方法为向固液分离后的浓缩菌液加水充分搅拌洗涤，离心去除杂质，其中，加水量为浓缩菌液的1-10倍。

5.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(3)中，菌体细胞壁破壁裂解方法包括以下步骤：

a.洗涤浓缩后的盐单胞菌菌液复水创造低渗环境；

b.调节菌液温度至最适破壁温度；

c.调节菌液的pH至最适pH；

d.加入阴离子表面活性剂。

6.根据权利要求5所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，上述步骤a中，洗涤浓缩后的盐单胞菌菌液复水后的体积为浓缩菌液体积的1-10倍；和/或，上述步骤b中，菌液破壁所需温度为30℃-120℃，优选为40℃-100℃，更优选为60℃-90℃；和/或，上述步骤c中，菌液破壁所需的最适pH为8.5-13.0，优选为9.0-12.0，更优选为9.5-11.5；和/或，上述步骤d中，菌液破壁所需的阴离子表面活性剂为十二烷基磺酸钠，优选地，步骤d中，菌液破壁所需的阴离子表面活性剂(例如，十二烷基磺酸钠)添加量为破壁菌液体积的0％-5％(w/v)，更优选为0.2％-1.0％(w/v)。

7.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(3)中，菌液破壁所需时间为0.5h-2h，优选为0.5h-1.5h；和/或，步骤(3)中，菌液破壁过程中使用2000rpm-20000rpm转速离心。

8.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(4)中，所述的分离PHA和非PHA物质的方法为离心法、过滤法或絮凝法，优选为离心法，优选地，所述的离心法采用的离心机是低速离心机或高速离心机，更优选为高速离心机，离心机的分离因素为2000-20000，优选为4000-20000，更优选为5000-20000。

9.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(5)中，所述的PHA的纯化方法为：向除去非PHA物质的PHA浓缩液加入水，充分搅拌洗涤，然后离心去除洗涤液，重复此过程2-3次，即可完成PHA的纯化，优选地，PHA浓缩物加水洗涤过程中，加水量为浓缩物体积的1-10倍，更优选为1-5倍。

10.根据权利要求1所述的制备聚羟基脂肪酸酯(PHA)的方法，其中，步骤(6)中，所述的PHA干燥方法选自常温通风干燥、加热通风干燥、真空冷冻干燥、喷雾干燥。