[发明专利]一种复合检测抗原及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物免疫检测技术领域，具体涉及一种复合检测抗原及其应用，尤其涉及一种复合检测抗原、检测试剂盒及其在类风湿关节炎检测上的应用。

背景技术

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种常见的且难以治愈的疾病，引起关节不可逆的损伤，发病后期往往导致患者残疾，影响生活质量，丧失工作能力。其特征是持续的滑膜炎、全身性的炎症和存在自身抗体。目前RA的病因和发病机制仍知之甚少，及时诊断、及早治疗对于疾病的控制具有重要的意义。目前临床上用于诊断RA的方法很多，2010年美国风湿协会(ACR)诊断标准中规定了关节受累数量和病程，以及生物因子(RF、CCP、CRP等)与RA密切相关。然而目前临床上采用的CCP、RF、GPI、AKA等联合诊断，仍有部分的RA患者(特别是早期RA患者)未能及时检出。因此寻找RA相关的生物标志物得到持续的关注。

RA是一种自身免疫疾病，在其发病过程中许多功能蛋白发生了异常的翻译后修饰，如瓜氨酸化、氨甲酰化、糖基化等。这些异常修饰的蛋白能激发体内免疫系统反应从而产生自身抗体。

迄今的研究已经证实，对RA特异性最高的自身抗体是针对含瓜氨酸表位的自身抗体，这些抗体被称为含瓜氨酸蛋白抗体(ACPA)。有研究显示，ACPA阳性和ACPA阴性的RA患者在遗传基因、环境危险因素、疾病进展和缓解等方面都有所不同。过去的研究主要聚焦于ACPA阳性RA患者的病因学、病情进展和治疗等方面，而对ACPA阴性的RA患者研究较少。

抗甲酰化蛋白抗体(CarP)是陈燚琼等报道在RA患者体内检测出的另一类新的自身抗体，不仅ACPA阳性的RA患者能检测到抗CarP抗体，约30％ACPA阴性RA患者也能检测到该抗体，而且有研究表明，抗CarP抗体可在RA确诊前数年出现。

上述方法都采用单一的抗体进行检测，检测灵敏度不够高，特异性不强，检测结果不够准确。

目前临床诊断中的通常检测自身抗体RF和CCP，RF在RA疾病中特异性比较低(低于80％)，而CCP2的特异性虽可达到90％以上，但其灵敏度却仅有70％左右，而在早期RA患者中，CCP灵敏度只有不到50％，因此，RA诊断需要开发新的更具诊断意义的方法，以提高诊断结果的准确性。

发明内容

本发明的目的在于提供一种复合检测抗原及其应用，所述检测抗原为瓜氨酸化蛋白与氨甲酰化蛋白的组合，能够一次检测多种RA自身抗体，克服了单一自身抗体检测灵敏和特异性不足、以及多种自身抗体单次逐一检测在操作上的繁琐，大大提高了检测效率和结果判断的准确性。

为达到此发明的目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种检测抗原，所述检测抗原为瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白的组合抗原。

本发明中，发明人发现通过采用瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白进行组合来检测，相比于采用单一的瓜氨酸化蛋白或单一的氨甲酰化蛋白检测的检测灵敏度明显提高，两种蛋白协同作用，共同检测多种自身免疫性抗体，相比于采用其中一种蛋白作为检测抗原，提高了检测的效率和结果的准确性。

优选地，所述瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白的质量比为(5-8):(5-2)，例如可以是5:2、5:3、5:4、5:5、6:2、6:3、6:4、7:1、7:2、7:3、8:1、8:2、8:3、8:4、8:5，优选为8:2。

发明人发现，采用上述比例的瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白，可以最大限度的发挥瓜氨酸化蛋白和氨甲酰化蛋白的协同作用，提高了检测效率和结果的准确性。

优选地，所述组合抗原的工作浓度为1-20μg/mL，例如可以是1μg/mL、2μg/mL、3μg/mL、4μg/mL、5μg/mL、6μg/mL、7μg/mL、8μg/mL、9μg/mL、10μg/mL、11μg/mL、12μg/mL、13μg/mL、14μg/mL、15μg/mL、16μg/mL、17μg/mL、18μg/mL、19μg/mL或20μg/mL，优选为2-10μg/mL。