[发明专利]抗人SAA单克隆抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种SAA单克隆抗体03‑7‑3，所述SAA单克隆抗体03‑7‑3的重链为IgG1，轻链为κ，其重链、轻链可变区氨基酸序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。本发明所述SAA单克隆抗体03‑7‑3能够特异性识别疾病相关的SAA‑ApoA1‑HDL复合物以及SAA蛋白，并基于该SAA单克隆抗体03‑7‑3建立了SAA‑ApoA1‑HDL复合物以及SAA蛋白的检测方法。所述SAA‑ApoA1‑HDL复合物与肝硬化显著相关，是肝硬化潜在的风险因子；而SAA蛋白浓度与乙肝后肝硬化及肝癌显著相关，是乙肝后肝硬化及肝癌潜在的风险因子。因此，本发明所述SAA单克隆抗体03‑7‑3对于预测肝硬化及肝癌发生的潜在风险以及对该疾病诊断标志物的开发具有重要的临床价值。

技术领域

本发明属于生物检测领域，具体涉及一种抗人血清淀粉样蛋白A(SerumAmyloidA,SAA)鼠源单克隆抗体03-7-3及分泌该单克隆抗体的杂交瘤细胞株，并利用该单克隆抗体建立在临床检测人外周血中SAA-ApoA1-HDL复合物(以下简称SAA/ApoA1)以及SAA蛋白的含量的检测方法，以预测发生肝硬化及或肝癌的潜在风险及评估其临床诊断应用价值。

背景技术

肝硬化(Cirrhosis)是临床常见的慢性进行性肝病，由一种或多种病因长期或反复作用而形成的弥漫性肝损害。肝硬化是肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝脏内纤维结缔组织异常增生的病理过程；过度纤维化使肝脏萎缩变硬，最终引起肝硬化失代偿、肝功能衰竭甚至发展为肝癌，从而导致患者死亡。

乙肝病毒(HBV)感染是导致肝硬化和肝癌的最常见的病因之一，全球约有20亿人感染过或正在感染乙肝病毒，其中有3.5亿人为终身感染者。众所周知，乙肝病毒感染后有着“肝炎-肝硬化-肝癌”三部曲表现，肝硬化是基于病毒侵犯肝脏后导致肝细胞长期慢性炎症、肝细胞死亡并由肝脏纤维组织增生发展而来，其中晚期肝硬化可能发展为肝癌。因此，由HBV感染导致的肝硬化在我国的发病逐年增加。据不完全统计，我国慢性乙型肝炎病人约为2000万人，其中近25～30万慢性乙肝病人可发展为肝硬化，其中5～20万可能发展为肝癌。而我国每年死于肝硬化的人数高达20万。因此，如果能够发现易感人群并进行早期诊断和干预，则会大大降低肝硬化乃至肝癌的发病率，降低患者死亡率、减少医疗费用并提高患者的生活质量；同时，肝硬化易感人群的发现对于了解其发病机理并寻找干预手段也有重要科学意义和临床应用价值，这将对人类最终攻克这一顽疾有重要意义。

人血清淀粉样蛋白A(SerumAmyloidA,SAA)是一种由104个氨基酸组成的急性期蛋白，其在天然状态时的分子量大约为12-14kDa，其编码基因位于人类第11号染色体。早期的研究认为SAA是一种急性炎性蛋白，SAA主要是由肝脏活化的巨噬细胞和纤维母细胞合成。根据在体内表达情况，SAA分为两类：急性期SAA(acute SAA,A-SAA)和组成型SAA(constitutive SAA,C-SAA)。正常人体内SAA主要来源于肝细胞组成型的C-SAA，当机体受到感染、炎症、损伤等刺激后产生一系列细胞因子，在细胞因子(IL-1和IL-6)的调控下急性期A-SAA水平迅速升高，浓度达正常水平的100-1000倍(正常值一般小于10mg/L)，成为此时体内主要的SAA。另外，SAA蛋白氨基端的50－76个氨基酸片段可形成不可溶性的纤维，在肝脏沉积后可能会促进肝纤维化。另一方面，肝内合成的SAA释放入血以后迅速与高密度脂蛋白(HDL)结合并通过细胞表面及细胞内的蛋白酶在肝脏降解。并且，SAA可替代HDL上的载脂蛋白A1(ApoA1)，使具有抗炎作用的HDL转变为促炎作用，并影响胆固醇的转运及代谢，进而可能引起肝组织的慢性炎症、肝损伤，甚至肝硬化。肝外细胞产生的SAA则通过细胞间的黏附及内吞作用经蛋白酶降解，肝脏是SAA主要的降解场所。因此，被SAA替代了部分ApoA1的，具有促炎作用的SAA-ApoA1-HDL复合物(以下简称SAA/ApoA1)以及SAA蛋白水平可能与肝硬化等肝脏疾病的发生发展密切相关。目前，检测SAA-ApoA1-HDL复合物的方法以及对其与肝脏疾病的研究尚未见其它报道。

发明内容