[发明专利]深色有隔内生真菌HS40及其在铁皮石斛生产上的应用

说明书

本发明涉及深色有隔内生真菌HS40及其在铁皮石斛生产上的应用。本发明公开了保藏编号为CGMCC NO.14345的深色有隔内生真菌HS40，该内生真菌能够显著促进铁皮石斛的生长及发育，接种该菌株的平皿培养铁皮石斛苗株高、茎径、植株鲜重和干重分别较对照增加21.2％、28.4％、7.5％和140.7％,其中，株高和干重与对照差异均达极显著水平；该菌株处理的铁皮石斛盆栽苗分蘖数、植株鲜重、植株干重和茎干多糖含量分别较对照增加400.0％、94.8％、56.8％、15.8％，其中分蘖数与对照差异达显著水平，植株鲜重、干重和茎干多糖含量则分别达到极显著水平，说明HS40可以有效促进铁皮石斛的生长。

【技术领域】

本发明涉及生物技术领域，特别涉及深色有隔内生真菌HS40及其在铁皮石斛生产上的应用。

【背景技术】

近年来，以美国“国家微生物组计划”为代表的世界微生物战略强化并聚焦了农业微生物在解决人类健康、环境保护、能源等重大问题方面的巨大作用，农业微生物研究已成为国际新一轮科技革命的战略“高地”。同时，近年来由于大量施用化肥、农药对粮食安全、生态环境和资源利用产生的危害也已引起国家高度重视，减少化肥、农药施用和提高化肥利用率成为当前我国农业生产中亟待解决的重要问题。利用自然界中植物共生微生物促进农作物生长符合国家的有关政策，将成为我国农业环境保护、农业可持续发展的一个重要方向。深色有隔内生真菌(DARK SEPTATE ENDOPHYTE，DSE)是植物共生真菌的典型代表之一，它们能够定居在植物根部但对宿主无致病性，菌丝深色有分隔，能够在根部形成微菌核等结构特征。研究表明，DSE能与宿主互惠共生，赋予植物优良生长性状，能提高宿主的抗病虫能力及在胁迫环境中的抗逆性，从而可减少化肥、农药的使用。这类真菌具有生态分布广泛、宿主范围广及可分离纯培养的特性，这就决定了它们在农业可持续发展中将发挥越来越重要的作用，具有更为广阔的应用前景。

铁皮石斛是一种珍稀名贵的药用和观赏植物，是我国重点保护的濒危珍稀物种。近年来，虽然铁皮石斛组织培养和人工栽培技术得到快速的发展，但铁皮石斛人工栽培生长缓慢、化肥农药过度施用仍是限制铁皮石斛产业发展的主要障碍。目前，铁皮石斛促生研究所涉及的内生真菌大多来源于铁皮石斛本身，很少来自其他宿主植物。谢玲等研究发现，分离自日本茨城大学农学院山茶树叶部的内生真菌24L-4菌株对铁皮石斛具有明显的促生作用。由此我们推测，我国本土优势植物同样蕴藏着可能对铁皮石斛具有良好促生功能的内生真菌。为发掘更多铁皮石斛优良促生内生真菌，在前期研究基础上，本研究拟从广西北部湾红树植物分离的内生真菌中筛选对铁皮石斛有显著促生作用的菌株，并结合菌株的形态学和分子生物学特征对其进行分类学鉴定，以期为广西优势红树植物内生真菌在铁皮石斛生产上的开发利用提供技术支持。

【发明内容】

鉴于上述发掘更多铁皮石斛优良促生内生真菌，促进广西优势红树植物内生真菌在铁皮石斛生产上的开发利用，本发明目的在于提供一种深色有隔内生真菌HS40及其在铁皮石斛生产上的应用。

为达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：深色有隔内生真菌HS40，保藏编号为CGMCC NO.14345。

在本发明中，作为进一步说明，所述的深色有隔内生真菌HS40的分离包括以下步骤：

(1)样品采集：选择红树林优势树种-木榄进行采样，采用五点采样法采集木榄根、茎、叶部组织，放入4℃的冰盒中保存备用；

(2)培养基的配置：菌株分离培养基使用1/2玉米粉培养基；纯化培养基使用麦芽汁培养基或马铃薯培养基；宿主植物-西红柿种子催芽使用纯琼脂培养基；栽培西红柿以及培养真菌菌丝使用燕麦培养基；

(3)真菌的分离纯化：对采集到的样本组织进行清洗和表面消毒，将表面消毒后的植物组织块置于菌株分离培养基平板上，每皿3块组织块，每个样本5皿，于25℃培养逐日观察是否有菌丝长出，待菌丝从组织块部位长出后及时转接到纯化培养基上，获得纯化的真菌菌株；