[发明专利]一种基于高亲和力CD45兔单抗的循环肿瘤细胞高效富集方法及其应用

说明书

本发明提供基于高亲和力CD45兔单抗的高效富集循环肿瘤细胞的方法及其应用。具体而言，本发明提供一种含有抗体的组合物，所述抗体包括抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗，或由抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗组成。本发明还包括利用所述组合物分离白细胞和富集循环肿瘤细胞的方法。本发明的抗体组合亲和力高，能更好的标记各种白细胞亚类，从而能够更好的去除白细胞，更高效地富集CTCs，同时不会损伤CTC细胞，使得CTC细胞维持良好的自然状态和细胞形态。

技术领域

本发明属分子生物学领域，涉及一种基于高亲和力CD45兔单抗的循环肿瘤细胞高效富集方法及其应用。

背景技术

循环肿瘤细胞(Circulating Tumor Cells,CTCs)是指在肿瘤生长过程中从肿瘤原发灶脱落并进入外周血循环系统的实体瘤上皮细胞。CTCs作为原发灶和转移灶的链接会通过血液循环系统依附到远端组织上生长形成新的肿瘤组织--转移灶。大量临床数据表明肿瘤转移是直接导致肿瘤患者死亡的直接原因，因而CTCs数目检测能实现对肿瘤发展的实时监测，对CTCs数目的实时监测不仅能判断机体免疫力的状态还对辅助诊断疾病、预后、指导临床治疗、治疗效果评估、耐药性和转移复发等有着很重要的临床研究价值。现有数据表明，CTCs早在肿瘤初期就可以在外周血中被检测到，而研究发现在肿瘤早期就被发现的癌症患者治愈率可高达90％，越晚期的肿瘤患者的生存率则越低。另外世界卫生组织也指出，癌症的预防治疗应秉持早发现、早诊断、早治疗的原则，因此CTCs数目检测对肿瘤的早筛也具有很重要的临床价值意义。

但如何从外周血中有效、准确的分离出CTCs是非常关键的同时也是非常复杂的，因为血液中存在着大量的血液细胞，其中红细胞含量约为5x10¹²个/L、白细胞含量约为9x10⁹个/L、血小板含量约为3x10¹¹个/L。在如此多的血液细胞中，CTCs的含量及其稀少，肿瘤患者血液中每10⁶～10⁷(一百万～一千万)个白细胞中才会发现一个CTC。

随着检测技术的不断进步，捕获CTCs的方法有很多，主要分为以下三大类：利用CTCs与血液细胞的体积大小差异进行过滤捕获，利用CTCs表面标记物直接进行捕获，和利用针对血液中的各种细胞抗体磁珠的组合进行捕获。

利用CTCs与血液细胞体积大小差异进行过滤捕获的方法的基本原理来自于CTCs与肿瘤细胞的大小相似这一假设。此方法利用细胞筛过滤掉体积较小的白细胞从而留下体积较大的CTCs从而达到捕获CTCs的目的。此方法优点在于可以方便并迅速地将CTCs与血细胞分离开，但是越来越多的研究发现，有部分CTCs与白细胞大小类似，甚至小于白细胞，这是因为肿瘤细胞在上皮细胞间质转型(epithelial-mesenchymal transition，EMT)转化过程中由于细胞骨架的重建从而导致了CTCs的体积变小。小细胞CTCs在临床上的意义也得到了越来越多的关注，因此过滤捕获的方法会导致大量的小细胞CTCs丢失。另外，因为捕获到的CTCs是在滤膜上面，对于后期的CTCs培养和下游的技术研究也会造成很大的困难。