[发明专利]一种基于高亲和力CD45兔单抗的循环肿瘤细胞高效富集方法及其应用

权利要求书

1.一种含有抗体的组合物，其特征在于，所述抗体由抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗组成；其中，所述抗CD45单抗为兔抗人单克隆抗体，其亲和力大于3.0×10^-11M；其中，所述组合物中抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗之间的用量比例为1：2～4：2～4：2～4。

2.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述抗体偶联了生物素。

3.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗各自独立为兔抗人单克隆抗体或鼠抗人单克隆抗体。

4.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述抗体为兔抗人CD45单克隆抗体、鼠抗人CD16单克隆抗体、鼠抗人CD19单克隆抗体和鼠抗人CD235a单克隆抗体。

5.如权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述组合物中抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗之间的用量比例为1：3：3：3。

6.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求1－5中任一项所述的含有抗体的组合物，和任选的磁珠。

7.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中，所述含有抗体的组合物和磁珠分别置于不同的容器中。

8.如权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，所述磁珠偶联了链霉亲和素。

9.抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗的组合物在分离血液中的白细胞或在富集外周血循环肿瘤细胞中的应用，或在制备用于分离血液中的白细胞或用于富集外周血循环肿瘤细胞的试剂或试剂盒中的应用；其中，所述抗CD45单抗为兔抗人单克隆抗体，其亲和力大于3.0×10^-11M；所述抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗之间的浓度比例为1：2～4：2～4：2～4。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗各自独立为兔抗人单克隆抗体或鼠抗人单克隆抗体。

11.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗CD16单抗为鼠抗人CD16单克隆抗体，所述抗CD19单抗为鼠抗人CD19单克隆抗体，所述抗CD235a单抗为鼠抗人CD235a单克隆抗体。

12.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述抗CD45单抗、抗CD16单抗、抗CD19单抗和抗CD235a单抗之间的浓度比例为1：3：3：3。

13.一种分离血液中白细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）孵育血液与权利要求1－5中任一项所述的组合物的混合物；和

（2）孵育结束后，加入磁珠，孵育并分离出结合了白细胞的磁珠；

从而分离出血液中的白细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述血液是除去了红细胞和血浆的血液。

15.一种富集循环肿瘤细胞的方法，其特征在于，所述方法包括：

（1）离心，除去血浆；

（2）离心，除去红细胞；

（3）洗涤步骤（2）获得的液体；

（4）在步骤（3）获得的液体中加入权利要求1－5中任一项所述的含有抗体的组合物，孵育，离心清洗；

（5）在步骤（4）获得的细胞中加入偶联了链霉亲和素的磁珠，孵育；和

（6）孵育结束后，除去磁珠，从而富集循环肿瘤细胞。

16.如权利要求15所述的方法，其特征在于，

所述步骤（4）包括，将步骤（3）获得的液体与所述含有抗体的组合物混合，孵育10～30分钟后，离心、清洗；

所述步骤（5）包括，加入链霉亲和素偶联的磁珠，孵育10～20分钟；

所述步骤（6）包括，孵育结束后，将含所述液体和磁珠的容器置于磁力架上，静置，使磁珠吸附在磁铁上，吸取未含有磁珠部分的液体；和

所述步骤（4）到步骤（6）在2～8℃的温度下进行。