[发明专利]具有免疫调节活性的均一多糖及其制备方法

权利要求书

1.具有免疫调节活性的均一多糖，其特征是：所述均一多糖中的单糖组成为α-D-吡喃葡萄糖，构型均为α型，连接方式为1→4连接；且

所述均一多糖为单一色谱峰，分子量为6880±5Da，旋光值为158.4±0.5°，红外光谱在847.6 cm^-1有特征吸收峰，其氢谱中的氢质子化学位移分别为δ 5.40brs，3.95 t，J =7.2Hz，3.84m，3.61m，碳谱中的碳信号化学位移分别为δ99.6，δ76.6，δ73.3，δ71.5，δ71.1，δ60.4；

所述均一多糖的制备方法包括如下步骤：

步骤1：水加热提取，醇沉制备总多糖；

将猪苓药材粉碎，取300g加3 L去离子水，室温浸泡1小时后100℃加热回流提取2次，每次1h，过滤，合并滤液，浓缩至600 ml，3000 rpm离心10 min，上清液调乙醇比例至大于80%，4℃静置过夜，滤过上清液，沉淀冷冻干燥得粗多糖，取粗多糖加纯水配成25～35溶液；

步骤2：Sevag法除粗多糖蛋白；

准备糖液：氯仿：正丁醇按25:4:1的比例加入试剂，倾入分液漏斗中充分震摇3min后静置分层，弃去有机层及沉淀，重复除蛋白多次至无白色沉淀产生，收集上清液，用旋转蒸发仪浓缩至适量体积后转移，冷冻干燥，得除蛋白后粗多糖；

步骤3：DEAE-52纤维素脱色素；

将经去蛋白后猪苓粗多糖分别加少量水溶解后，上经预处理后的DEAE-52纤维素柱35×3cm脱色，以1mL/min超纯水、0.1～0.5%氯化钠溶液洗脱，洗脱至流出液用苯酚-浓硫酸法无糖检出，收集峰值段洗脱液用旋转蒸发仪浓缩后冷冻干燥，脱盐，即得白色疏松粉末精多糖；

步骤4：Sephadex G-100凝胶柱精制；

将精多糖适量溶于蒸馏水中，上Sephadex G-100凝胶柱，以纯水、0.1～0.5%氯化钠溶液洗脱，流速1ml/min，洗脱液每10 mL收集一管，以苯酚-浓硫酸法跟踪监测；以检测管号为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制多糖洗脱曲线，收集峰值段洗脱液，冷冻干燥，脱盐即可获得均一多糖。

2.如权利要求1所述的具有免疫调节活性的均一多糖，其特征是：所述均一多糖中的多糖质量百分比含量为92～98%；采用Agilent1200液相色谱，示差检测器RID分析，色谱柱为TSK-GEL G4000 PWxL，流动相为超纯水，流速为0.3～1ml/min，检测器温度为30～40℃，柱温为30～50℃，色谱分析为单一峰，保留时间10～30 min。

3.如权利要求1所述的具有免疫调节活性的均一多糖，其特征是：所述均一多糖内还添加有荧光标记产物、羧甲基化产物、羟甲基化产物、羟丙基化产物、乙二醇化产物、丙二醇化产物或聚乙二醇化产物中的一种。

4.如权利要求1所述的具有免疫调节活性的均一多糖，其特征是：所述步骤3中DEAE-52纤维素柱的预处理方法为：

步骤1：将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中2～5h，去除杂质后抽干；

步骤2：采用0.5mol/L的HCL溶液浸泡1～3h，用去离子水洗净置PH为中性并抽干；

步骤3：再将抽干的纤维素浸泡在0.5mol/L的NaOH溶液中1～3h，用去离子水洗净置PH为中性并抽干即可。