[发明专利]一种纯化猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的方法

说明书

本发明提供一种纯化猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的方法，涉及生物领域。该纯化方法，包括采用融合蛋白PGFSN与GEM颗粒形成的复合物结合猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的步骤，所述融合蛋白PGFSN的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。本发明方法纯化猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒，操作简单、病毒回收率高，杂蛋白去除率高，成本低。

技术领域

本发明涉及生物领域，具体涉及一种纯化猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的方法。

背景技术

随着畜牧养殖业的快速发展以及养殖户对动物疫苗安全性和副作用认识的加深，高质量疫苗的市场需求也越来越大。抗原作为疫苗制造的首要环节，直接影响着疫苗质量的优劣。纵观人类疫苗的发展，其纯化技术大致历经了简单分离、初级分离和精制纯化三个阶段。

现阶段我国动物疫苗大多未经过纯化，疫苗中含有大量的杂质，如犊牛血清、细胞碎片等，研究显示疫苗中大量的杂蛋白是引起动物不良反应的主要因素，同时也严重干扰目标抗原的免疫应答，极大程度降低中和抗体的产生，从而引起机体免疫麻痹或免疫失败，这无疑对抗原纯化技术提出了更高的要求，也意味着纯化动物疫苗时代即将到来。

发明内容

本发明的目的是提供一种纯化猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的方法，操作简单、病毒回收率高，杂蛋白去除率高，成本低。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种纯化猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的方法，包括采用融合蛋白PGFSN与GEM颗粒形成的复合物结合猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒或禽流感病毒的步骤，所述融合蛋白PGFSN的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。

在本发明中，所述GEM颗粒是将乳酸乳球菌采用酸处理、煮沸后得到的。

在本发明中，所述融合蛋白PGFSN是通过诱导表达携带融合蛋白PGFSN编码基因的重组菌后获得的。

优选的技术方案中，所述融合蛋白PGFSN编码基因的序列如SEQ ID NO:2所示。

在本发明中，将诱导表达后的所述重组菌裂解，离心后取裂解液上清作为融合蛋白PGFSN。

在本发明中，将2.5×10⁹个GEM颗粒与95～105μg融合蛋白PGFSN混合，孵育后形成了融合蛋白PGFSN与GEM颗粒的复合物。

优选的技术方案中，在2.5×10⁹个GEM颗粒与95～105μg融合蛋白PGFSN形成的复合物中加入10^8.55TCID₅₀的PEDV病毒液、10^8.09TCID₅₀的PRRSV病毒液或50mL血凝价为1:256的H9N2病毒液。

在本发明中，所述融合蛋白PGFSN与GEM颗粒的复合物结合所述病毒后，离心，取沉淀。