[发明专利]一种干扰素α-2b突变体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种干扰素α‑2b突变体及其制备方法和应用，天然的干扰素α‑2b的氨基酸序列中从N端计第18位的赖氨酸突变为脂肪族类氨基酸，和/或，从N端计第110位的亮氨酸突变为杂环氨基酸，所述的脂肪族类氨基酸选自蛋氨酸、丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸中的一种，所述的杂环氨基酸选自脯氨酸、组氨酸和色氨酸中的一种。本发明提供的干扰素α‑2b突变体的比活性高、稳定性好、体内半衰期大大延长，可以提高患者使用干扰素药物的依从性，血药浓度波动小，也进一步提高了疗效。

技术领域

本发明属于干扰素领域，具体地说，涉及一种干扰素α-2b突变体及其制备方法。

背景技术

干扰素(Interferon，IFN)是人和动物细胞受到病毒感染，或者受核酸、细菌内毒素、促细胞分裂素等多种因素诱导后，由受体细胞分泌的一类细胞因子，具有广谱抗病毒及免疫调节等作用；1957年由Isaacs和JeanLindenmann首先发现。目前，根据干扰素的产生细胞、受体和活性等综合因素一般将干扰素分为Ⅰ型、Ⅱ型和III型三类，Ⅰ型干扰素主要包括IFN-α和IFN-β，Ⅱ型只包括IFN-γ，III型干扰素包括IFN-λ1、IFN-λ2和IFN-λ3。

自发现干扰素以来，由于其广谱抗病毒、抗肿瘤以及强大的免疫调节作用而成为免疫学、病毒学、细胞生物学、分子生物学、临床医学、肿瘤学等相关领域的研究热点。同时，干扰素作为生物体内基因自身稳定的一个系统，奠定了在生物学研究中的地位。目前已知除抗病毒活性外，IFN还具有免疫调节、抑制细胞增殖、抗肿瘤生长、与多种淋巴因子协同作用等多种重要的生物功能。

干扰素α2b(Interferonα2b，IFNα2b)作为一种具有广泛生物学活性的细胞因子，在抗病毒、抗细菌感染和抗肿瘤等治疗中被广泛应用。目前，在临床上IFNα2b已被广泛应用于HPV感染，慢性髓系白血病和肾癌等的治疗，并取得了显著的效果。

但是天然的干扰素α2b体内半衰期比较短，一般t1/2只有1.5-2.0个小时左右，因此临床应用需要反复给药，患者依从性比较差；而且因为半衰期短而导致血药浓度波动大，导致疗效不佳。

延长干扰素半衰期的方法主要有PEG修饰、白蛋白融合等技术。目前已开发上市的聚乙二醇干扰素α-2b制剂，半衰期可达40～65h。但是，PEG的修饰也存在扩散速度受限和生物活性低等问题。同样，白蛋白融合干扰素蛋白分子更大，也存在药物自血液向目标组织的输送速度受到限制的问题。因此，如何提高干扰素α-2b的稳定性，延长其半衰期是本领域急需解决、有重要意义的问题。

有鉴于此特提出本发明。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，提供一种干扰素α-2b突变体及其制备方法和应用，本发明提供的干扰素α-2b突变体的比活性高、稳定性好、体内半衰期大大延长，可以提高患者使用干扰素药物的依从性，血药浓度波动小，也进一步提高了疗效。

为解决上述技术问题，本发明采用技术方案的基本构思是：

本发明的第一目的是提供一种干扰素α-2b突变体，干扰素α-2b的氨基酸序列中从N端计第18位的赖氨酸突变为其它的脂肪族类氨基酸，和/或，从N端计第110位的亮氨酸突变为杂环氨基酸。

天然干扰素α-2b体内半衰期比较短，临床应用需要反复给药，患者依从性比较差，而采用PEG修饰、白蛋白融合等技术延长其半衰期的方式又存在药物自血液向目标组织的输送速度受到限制的问题、生物活性较低等问题。

本发明的IFNα-2b突变体氨基酸序列的设计，是根据IFNα2b已知空间结构、受体结合位点及与受体结合原理，通过计算机模拟突变分子的空间结构及进化差异，保证空间结构变化不明显和进化差异较小的条件下，选择了第18位赖氨酸Lys和第110位亮氨酸Leu分别或同时替换为其它的氨基酸，来提高干扰素IFNα-2b的稳定性。