[发明专利]基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系的制备方法及其应用

权利要求书

1.一种基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系的制备方法，其特征在于包括以下步骤：

(1)银聚集体-聚合物SERS免疫探针的制备

A.将1.47-4.41毫克柠檬酸钠和1.97-5.91毫克氯金酸溶于20-60毫升水制成混合溶液，于室温下边剧烈搅拌边加入0.6-1.8毫升新鲜配制的浓度为4毫克/毫升的硼氢化钠水溶液，得到金种子溶液；

B.取3-9毫升金种子溶液加入到50-150毫升含有硝酸银和柠檬酸钠的水溶液中，之后向其中逐滴加入10-30毫升浓度为2毫克/毫升的抗坏血酸水溶液，反应1小时得到银纳米颗粒水溶液；

C.取1-3毫升银纳米颗粒水溶液离心浓缩为10-30微升，向其中逐次加入820-2460微升二甲基甲酰胺，5-15微升含2-萘硫酚的二甲基甲酰胺溶液和20-60微升水，然后置于60℃烘箱中培养3小时之后，向其中加入80-240微升含有聚苯乙烯聚丙烯酸双嵌段共聚物的二甲基甲酰胺溶液和180-540微升水，然后置于110℃烘箱中培养2小时后离心，得到的沉淀物即为银聚集体-聚合物，将沉淀物重溶于磷酸盐缓冲溶液中得到银聚集体-聚合物的缓冲溶液；

D.取1-3毫升银聚集体-聚合物的缓冲溶液，加入20-60微升含抗体的缓冲溶液，于4℃下反应2小时，离心去除多余未反应的抗体后，再加入10-30微升含牛血清白蛋白的缓冲溶液，于室温下反应1小时，以封闭银聚集体-聚合物未被抗体附着的位点，离心去除多余未反应的牛血清白蛋白后，即得到银聚集体-聚合物SERS免疫探针，并置于4℃下储存待用；

(2)金纳米线阵列免疫基底的制备

A.将亲水化的硅片置于浓度为1.1-3.3毫克/毫升的3-氨丙基三乙氧基硅烷水溶液中1小时使其表面修饰上氨基；将修饰有氨基的硅片置于粒径为3-5纳米的金纳米颗粒水溶液中2小时，使其表面吸附上金纳米颗粒；将吸附有金纳米颗粒的硅片置于含有4-巯基苯甲酸、氯金酸和抗坏血酸的水溶液中反应15分钟之后，即在硅片表面得到金纳米线阵列；

B.在金纳米线阵列上滴加20-60微升含抗体的缓冲溶液于4℃下反应2小时，清洗去除多余未反应的抗体后，再滴加10-30微升含牛血清白蛋白的缓冲溶液于室温下反应1小时，以封闭金纳米线阵列上未被抗体附着的位点，清洗去除多余未反应的牛血清白蛋白后即得到金纳米线阵列免疫基底，并置于4℃下储存待用；

(3)癌症标志物检测体系组装

将含待测抗原的磷酸盐缓冲溶液滴加到金纳米线阵列免疫基底上，将其置于37℃下静置2小时，使抗原和抗体之间的免疫反应充分进行，清洗去除多余未反应的待测抗原；再将15微升银聚集体-聚合物SERS免疫探针滴加到吸附有待测抗原的金纳米线阵列免疫基底上，于37℃下反应2小时，清洗去除多余未反应的银聚集体-聚合物SERS免疫探针，即得到基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系。

2.根据权利要求1所述的基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系的制备方法，其特征在于：

步骤(1)B中所述的含有硝酸银和柠檬酸钠的水溶液中硝酸银浓度为0.2毫克/毫升以及柠檬酸钠浓度为0.6毫克/毫升；

步骤(1)C中所述的含2-萘硫酚的二甲基甲酰胺溶液中2-萘硫酚的浓度为10毫克/毫升；所述的含有聚苯乙烯聚丙烯酸双嵌段共聚物的二甲基甲酰胺溶液中聚苯乙烯聚丙烯酸双嵌段共聚物的浓度为8毫克/毫升；

步骤(1)D中所述的含抗体的缓冲溶液中抗体的浓度为2毫克/毫升，缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液；所述的含牛血清白蛋白的缓冲溶液中牛血清白蛋白的质量浓度为3％，缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液。

3.根据权利要求1所述的基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系的制备方法，其特征在于：步骤(1)C和D中离心速度为5000-15000转/分钟，离心时间为5-30分钟。

4.根据权利要求1所述的基于银聚集体-聚合物和金纳米线阵列的癌症标志物检测体系的制备方法，其特征在于：步骤(2)A中所述的含有4-巯基苯甲酸、氯金酸和抗坏血酸的水溶液中4-巯基苯甲酸的浓度为0.85-2.55毫克/毫升，氯金酸的浓度为0.07-0.21毫克/毫升和抗坏血酸的浓度为0.7-2.1毫克/毫升；步骤(2)B中所述的含抗体的缓冲溶液中抗体的浓度为2-6毫克/毫升，缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液；所述的含牛血清白蛋白的缓冲溶液中牛血清白蛋白的质量浓度为3％，缓冲溶液为磷酸盐缓冲溶液。