[发明专利]一种成熟脂肪细胞去分化培养的装置及方法

权利要求书

1.一种成熟脂肪细胞去分化培养的装置，其特征在于，包括培养皿(1)、皿盖(2)和离体设置的敞口小室(3)；所述小室在脂肪细胞贴壁培养阶段使用时倒置于培养皿中且能够完全没入培养皿中，在脂肪细胞贴壁增殖培养阶段使用时，与培养皿离体正置放置。

2.一种基于权利要求1所述装置的成熟脂肪细胞去分化培养方法，包括以下步骤：

将成熟脂肪细胞液加入到培养皿中，再将小室倒置于培养皿中，使小室中充满成熟脂肪细胞液，倒置进行脂肪细胞贴壁培养6～7天，待50～60％的细胞贴于小室上壁，将小室正置，去掉培养皿，皿盖盖于小室上进行贴壁增殖培养3～7天，得到去分化脂肪细胞。

3.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述成熟脂肪细胞液的制备方法包括以下步骤：

将脂肪细胞剪碎，加入质量浓度为0.25％的胰蛋白酶消化液进行消化，所述消化后用含体积浓度为20％胎牛血清的DMEM培养基终止消化，得到消化细胞液；

用孔径为250μm的尼龙网筛过滤所述消化细胞液，将过滤得到的细胞液在1200r/min转速下离心10min，弃沉淀，离心得到的顶层悬浮液为成熟脂肪细胞液。

4.根据权利要求3所述的培养方法，其特征在于，所述质量浓度为0.25％的胰蛋白消化液的体积与脂肪细胞的质量比为(0.5～1)mL：1g。

5.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，所述脂肪细胞贴壁增殖培养过程中每2d换液一次。

6.根据权利要求5所述的培养方法，其特征在于，换液用培养基为含体积浓度20％胎牛血清的DMEM培养基。

7.根据权利要求2所述的培养方法，其特征在于，整个培养过程的条件为：37℃，5％CO₂。