[发明专利]一种稻瘟病菌激发子Mo65及其纯化方法

权利要求书

1.稻瘟病菌激发子Mo65在引起C101LAC和CO39品系水稻抗性反应中的应用；所述激发子属蛋白类，其相对分子质量为65.5kDa，其氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示；

所述应用为稻瘟病菌激发子Mo65能够诱导C101LAC和CO39品系水稻中过氧化物酶和苯丙氨酸解氨酶活性以及活性氧水平的升高；

所述稻瘟病菌激发子Mo65的有效浓度为0.02～0.15nmol/L。

2.权利要求1所述稻瘟病菌激发子Mo65的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.稻瘟病菌菌丝的培养：将稻瘟病菌ZC13小种菌丝置于液体培养基中于25℃下恒温振荡培养14d，单层纱布过滤，用双蒸水反复洗涤4次；

S2.粗激发子的提取：采用冻融法破碎菌丝细胞；将冻融的菌丝于2000×g离心25min，弃去上清液；沉淀用双蒸水重新悬浮、离心，反复4次；经匀浆、4℃搅拌过夜；12000×g离心20min后取上清液；上清液经超滤后获得浓缩液，即为粗激发子；

S3.DEAE-Sepharose FF柱层析：将S2所得粗激发子上样DEAE-Sepharose FF阴离子交换柱，用缓冲液充分淋洗，再用含0～0.75mol/L NaCl的缓冲液进行线性梯度洗脱，收集活性峰样，再用缓冲液透析脱盐；

S4.CM-Cellulose柱层析：将S3所得活性峰样进一步上样CM-Cellulose阳离子交换柱，先用缓冲液充分淋洗，再用含0～0.5mol/L NaCl的缓冲液洗脱，收集活性组分；

S5.Sephadex G-75柱层析：将S4所得活性组分进一步上样Sephadex G-75凝胶柱，用缓冲液洗脱，收集活性组分，即得到所述稻瘟病菌激发子；

所述稻瘟病菌激发子Mo65的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。