[发明专利]一种免疫抑制细胞制剂及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种免疫抑制细胞制剂及其制备方法和应用。

背景技术

系统性红斑狼疮(Systemic Lupus Erythematosus，SLE)是一种弥漫性、全身性自身免疫病。在环境因素、雌激素水平等各种因素相互作用下，导致T 淋巴细胞减少、T抑制细胞功能降低、B细胞过度增生，产生大量的自身抗体，并与体内相应的自身抗原结合形成相应的免疫复合物，沉积在皮肤、关节、小血管、肾小球等部位。在补体的参与下，引起急慢性炎症及组织坏死(如狼疮肾炎)，或抗体直接与组织细胞抗原作用，引起细胞破坏(如红细胞、淋巴细胞及血小板壁的特异性抗原与相应的自身抗体结合，分别引起溶血性贫血、淋巴细胞减少症和血小板减少症)。SLE可累及机体多个系统，包括关节、肌肉、肾脏、神经系统、血液系统、心脏和消化系统等，给患者多个组织脏器带来病理损害。

SLE的治疗强调早期诊断和早期治疗，以避免或延缓组织的病理损害。现有治疗药物主要包括非甾体抗炎药、抗疟药、糖皮质激素和免疫抑制剂，其中非甾体抗炎药、抗疟药和糖皮质激素主要用于症状轻微，无明显内脏损害的患者症状改善治疗，以阻止或减少免疫细胞对内脏的损伤；免疫抑制剂如环磷酰胺、硫唑嘌呤等是治疗SLE的有效药物之一，能有效的诱导疾病缓解，阻止和逆转病变发展，改善远期预后，其缺陷主要在于长期使用，会使机体免疫功能受到抑制，不能从根本上治疗机体免疫系统紊乱和病情反复。

Treg是一类调节性T细胞，对机体免疫起着抑制作用，能抑制对自身或外源抗原有害的的免疫反应。Treg细胞对于多种免疫失调疾病均具有治疗效果，在移植抗宿主反应和自身免疫疾病等动物模型中取得了显著效果，外周血来源的Treg细胞已经在欧洲多中心联合开展临床试验，但由于Treg细胞数量较少、扩增培养周期长，因此限制了其临床应用。近期研究显示脐带血来源的 Treg细胞与外周血来源的Treg细胞一样具有免疫抑制作用，研究文献(马小倩等，2016年)提供了体外扩增脐血来源Treg细胞的分离纯化和扩增培养方法，使用该方法获得的Treg细胞数量和效力均能满足临床需求，为临床应用提供了可能。本发明即提供了一种含Treg细胞的免疫抑制制剂，及其在制备预防和治疗自身免疫性疾病系统性红斑狼疮药物中的应用。

发明内容

为了解决现有技术中系统性红斑狼疮治疗药物药效不足、副作用多这一技术问题，本发明实施例提供一种预防和治疗系统性红斑狼疮的免疫抑制细胞制剂及其制备方法。

本发明的具体技术方案如下：

一种免疫抑制细胞制剂，包括：Treg细胞、脐带间充质干细胞外泌体、脐血单个核细胞、脐血浆和医学上可接受的溶剂；

所述Treg细胞的浓度为1×10⁶～5×10⁶个/mL；

所述外泌体的浓度为每毫升细胞制剂中含有5×10⁷～1×10⁸个脐带间充质干细胞中所提取出来的外泌体总量；

所述脐血单个核细胞的浓度为1×10⁶～5×10⁶个/mL；

所述脐血浆的浓度为体积比5％。

优选地，所述Treg细胞为来源于脐带血的Treg细胞。

优选地，所述脐带间充质干细胞外泌体由脐带间充质干细胞经传代培养 2～5代后提取得到。

优选地，所述医学上可接受的溶剂包括生理盐水或5％葡萄糖注射溶液。

优选的，所述免疫抑制细胞制剂的制备方法为：将所述脐血浆和所述溶剂混合，加入Treg细胞、脐血单个核细胞和脐带间充质干细胞外泌体，混匀后置于4℃环境中保存。

本发明还提供了上述免疫抑制细胞制剂在制备预防或治疗系统性红斑狼疮药物中的应用。

本发明的技术方案的有益效果在于：

(1)本发明使用脐带血Treg细胞在会输后可立即发挥免疫抑制的功能，脐带干细胞外泌体能协同改善血液环境，强化Treg细胞的功能，血细胞类型会随着Treg细胞的回输而发生变化，各类型细胞因子的含量随之改变，从而起到级联调控的作用，抑制机体免疫亢进，起到立竿见影的效果。

(2)依赖于Treg细胞和脐带干细胞外泌体的免疫调控作用，能够进一步改善患者血液环境，从而更有利于脐血单个核细胞的分化，通过初期的免疫抑制和后期的免疫调控，从而持续性的改善自身免疫性疾病的免疫环境，从根本上解决机体免疫系统紊乱的问题；

(3)本发明开创性的采用了干细胞外泌体和脐血浆代替人血白蛋白，该方法能够保证细胞活率。