[发明专利]一种在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法

权利要求书

1.一种在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：在加入无菌采血袋的抗凝剂中添加80～120ng/ml环孢素A，在羟乙基淀粉溶液沉降剂中添加30～70ng/ml环孢素A，于密封的低氧工作站内进行造血干细胞的全程提取过程；所述低氧工作站设有两侧独立的操作台和一个转移闸，两侧操作台氧气浓度设置为3～8％，一侧操作台温度设为3～10℃，用于进行试剂的配制和分装、脐带血的转移、脐带血造血干细胞的冻存，另一侧操作台温度设为18～25℃，用于进行脐带血的沉降、脐带血的分浆、分浆后的离心。

2.根据权利要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：于操作前3小时打开所述低氧工作站，将所使用试剂、耗材和设备进行氧气浓度和温度平衡。

3.根据权利要求2所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：在进行所述氧气浓度和温度平衡的过程中，将75％医用酒精放入所述转移匣，将DMSO和右旋糖酐细胞冻存混合液放入温度设为3～10℃的所述操作台，将羟乙基淀粉溶液放入温度设为18～25℃的操作台，将耗材放入3～10℃的所述操作台。

4.根据权利要求2所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：在进行所述氧气浓度和温度平衡的过程中，将所述试剂和耗材的包装或封盖打开，以排除包装或腔体内多余的氧气。

5.根据权利权要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：所述抗凝剂中添加100ng/ml环孢素A，所述羟乙基淀粉溶液沉降剂中添加50ng/ml环孢素A。

6.根据权利权要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：两侧所述操作台氧气浓度设置为5％，其中一侧所述操作台温度设为5℃，另一侧操作台温度设为20℃。

7.根据权利要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：所述脐带血的沉降步骤和所述脐带血的分浆步骤在二联袋中进行，所述脐带血的分浆步骤采用血液分浆夹。

8.根据权利要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：所述血浆的离心步骤具体参数为：1800rpm/min，离心10min。

9.根据权利要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：所述转移闸用于所述操作台之前的物料传递，所述操作台与外界的物料传递，将操作期间产生的废弃物转移出所述低氧工作站。

10.根据权利要求1所述的在低氧环境下提取脐带血造血干细胞的方法，其特征在于：每100ml所述抗凝剂中含40mg肝素、0.9g氯化钠、10mg环孢素A，其余为无菌超纯水；每100ml所述羟乙基淀粉溶液沉降剂中含有0.9g氯化钠、6g羟乙基淀粉、5mg环孢素A，其余为无菌超纯水。