[发明专利]预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法

说明书

本发明公开了预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法。本发明公开的预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗，活性成分为将SEQ ID No.1的第20‑156位或SEQ ID No.1的第1‑156位所示的蛋白质糖基化得到的鲍曼不动杆菌糖蛋白。本发明用基因工程法制备鲍曼不动杆菌多糖修饰的rCTB4573用于鲍曼多糖蛋白结合疫苗的制备，可以提高疫苗的均一性，提高疫苗的生产效率，降低成本，具有广泛的应用前景，可用于预防鲍曼病原菌引起的疾病。

技术领域

本发明涉及生物技术领域中，预防和治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗及其制备方法。

背景技术

鲍曼不动杆菌(Acinetobacter baumannii，Ab)是一种需氧的、非发酵的革兰氏阴性球杆菌，在自然界中普遍存在，而且其具有生存能力强、无需特殊营养、定植率高、粘附能力强等特点，可引起获得性肺炎、血流感染、腹腔感染、脑膜炎、中枢神经系统感染、泌尿系统感染、皮肤软组织感染等。Ab已呈全球流行，是医院感染中最主要的一个条件致病菌，在医院中能引起爆发性流行感染，易在住院患者的皮肤表面、口腔、呼吸道、胃肠道和泌尿系统道定植。Ab感染危险因素包括：长时间住院、入住监护室、接受机械通气、侵入性操作、抗菌药物暴露以及严重基础疾病等。

由于抗生素的广泛使用，多重耐药、广泛耐药、全耐药的Ab检出率呈现出一个上升的趋势，Ab耐药情况日趋严重。由于多糖的免疫原性，可将其制成多糖疫苗，主要是将特异性的多糖纯化后制备而成，刺激机体产生保护性抗体，但多糖分子的大小也决定了免疫强度的大小，某些病原菌O-PS以及低分子量的CPS(如金黄色葡萄球菌CPS)作为疫苗的效果并不理想；而且多糖均属于2型T细胞非依赖抗原，在整个免疫过程中并没有T细胞的参与，因此不会形成免疫记忆。多糖-蛋白结合疫苗将细菌的聚糖共价连接到适当的蛋白载体上形成糖蛋白，不仅能刺激机体产生非T细胞依赖免疫反应，还能引起T细胞依赖免疫反应，从而产生长久的免疫效果，同时也克服了低分子量的多糖免疫效果不好的问题。

多糖-蛋白结合疫苗生产主要有两种方法，目前市场上多采用化学法制备，化学法是指CPS或者O-PS通过化学方法共价连接到载体蛋白，但化学方法质控困难，多糖与载体蛋白的随机交联导致产物均一性差，纯化和质量控制困难且生产过程步骤多，得率低，成本高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何治疗和预防鲍曼不动杆菌所致疾病。

本发明首先提供了预防和/或治疗鲍曼不动杆菌所致疾病疫苗的制备方法，包括：将鲍曼不动杆菌糖蛋白作为活性成分制备得到所述疫苗；

所述鲍曼不动杆菌糖蛋白按照鲍曼不动杆菌糖蛋白的制备方法制备，所述鲍曼不动杆菌糖蛋白的制备方法包括：将蛋白质(其名称为rCTB4573)在鲍曼不动杆菌中进行糖基化，得到所述鲍曼不动杆菌糖蛋白；

所述蛋白质为下述A1)-A4)中的任一种：

A1)CTB与序列表中SEQ ID No.1的第128-156位所示多肽的融合蛋白；

A2)DsbA信号肽、所述CTB与序列表中SEQ ID No.1的第128-156位所示多肽的融合蛋白；

A3)将A1)或A2)的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质；

A4)在A1)或A2)或A3)的N端或/和C端连接标签得到的融合蛋白质。

上述方法中，所述CTB可为c1)或c2)：

c1)序列表中SEQ ID No.1的第20-122位所示蛋白质；

c2)将序列表中SEQ ID No.1的第20-122位所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的蛋白质。

所述DsbA信号肽为b1)或b2)：