[发明专利]一种改良酚抽提总RNA的方法

权利要求书

1.一种改良酚抽提总RNA的方法，其特征在于，包括如下步骤：

a）使用重悬液重悬需要提取的生物材料；

b）加入与重悬液体积相同的裂解液，室温裂解3-5分钟，或65℃裂解0.5-1分钟；

c）加入与a）b）两步中溶液总体积相等的酚抽提液1，反复振荡混匀；12000r/min离心10-15分钟；吸取上清液；

d）向c）步骤所得上清液中加入两倍上清液体积的无水乙醇，上下反复颠倒，待充分沉淀；12000r/min离心10分钟；弃上清；

e）向d）步骤所得的沉淀中加入洗涤液，洗涤1~2次，再用超纯水溶解沉淀，所得即为总核酸溶液；

f）取e）步骤中的总核酸溶液，加入与总核酸溶液等体积的酸性醋酸钠溶液，以及等体积的氯化钠溶液；

g）加入同f）步骤中溶液等体积的酚抽提液2，反复混匀之后，12000r/min离心5-10分钟；吸取上清液；

h）向g）步所得的上清液中加入两倍上清液体积的无水乙醇，颠倒混匀，待沉淀完全后，12000r/min离心10分钟；弃上清；

i）加入洗涤液洗涤一次后，加入超纯水溶解沉淀，所得即为RNA样品；

步骤c）中，所述酚抽提液1为水饱和酚：氯仿：异戊醇体积比为25:24:1组成的混合液；

步骤e）中，所述洗涤液为75 ± 5%乙醇溶液；

步骤f）中，所述酸性醋酸钠溶液为醋酸钠和醋酸组成的混合溶液，其pH为3.85 ±0.10；

步骤f）中，所述酚抽提液2为水饱和酚：氯仿：异戊醇体积比为125:24:1组成的混合溶液；醋酸钠和醋酸的摩尔浓度均为50mmol/L。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤a）中，所述重悬液为超纯水；所述生物材料为细菌菌体，菌体与重悬液的质量/体积比为20-50mg/100μL。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，步骤b）中，所述裂解液为十二烷基硫酸钠溶液，其重量浓度为2 ± 0.2%。