[发明专利]一种使人造血管的持久保持通畅的试剂盒和方法

说明书

本发明涉及一种使人造血管的持久保持通畅的试剂盒，其包括脱细胞试剂和抗堵塞试剂组；所述脱细胞试剂为包含6‑10mmol/L CHAPS、20‑30mmol/L EDTA二钠盐、0.10‑0.15mmol/L NaCl和0.8‑1.2mol/L NaOH的水溶液；所述抗堵塞试剂组包括A溶液、B溶液和C溶液，其中，所述A溶液为包含30‑50mg/ml EDC和10‑30mg/mL Sulfo‑NHS的MES缓冲液，所述B溶液为包含75‑90mg/ml肝素的MES缓冲液，所述C溶液为包含10‑20μg/mlS‑SDF‑1的MES缓冲液。

技术领域

本发明涉及组织材料领域，更特别地，涉及一种提高人造血管的生物相容性的试剂盒和方法。

背景技术

临床上用于冠状动脉搭桥手术和其他小口径血管搭桥手术最为主要的桥血管一般是自体血管如大隐静脉、乳内动脉。目前，美国食品药品监督管理局(FDA)批准进行临床试验的两个脱细胞基质管道小口径血管分别是：1)Nicolas L’Heureux等使用的不含人工合成材料的脱细胞基质组织工程血管，大动物恒河猴腹主动脉移植实验6周通畅率为100％(n＝3)，动静脉瘘管I期临床实验1个月通畅率为78％(7/9)，6个月通畅率为60％(5/8)，但制备过程复杂，制备一根管道时间7-9月，花费1.5万美金，远期通畅率不理想，很难推广应用于临床；2)Laura Niklason等制备的组织工程血管，在可降解乳酸(PGA)管上种植人尸体血管平滑肌细胞并培养，待PGA降解后形成富含细胞和细胞外基质(胶原纤维)的管状组织，脱细胞得到以胶原纤维为主要成分的组织工程血管(含少量残余PGA)，大动物狒狒动静脉瘘管移植实验6个月通畅率100％(3/3)，FDA批准二期临床试验6月通畅率63％，12、18、24月通畅率分别是28％、18％、15％。由于是同种异体移植物存在移植免疫反应，并且制备过程复杂，制备时间至少2个月，易导致血栓形成、内膜增生，通畅率不佳，而且使用尸体血管平滑肌细胞有传播如艾滋病、乙型肝炎病毒等疾病风险。

此外，上述两种脱细胞基质管道由于管壁结构致密，周围细胞不能进入管壁参与重构，管壁细胞外基质成分不能有效更新，特别不能合成维持动脉管壁弹性的弹力纤维，严重影响其机械性能和通畅率。

其他研究者制备的未脱细胞自体血管移植物回植体内动脉，存在力学性能薄弱、血栓形成、管壁细胞增生导致血管通畅率低，同时制备过程中使用对机体有毒性的生物材料，很难实现临床转化。

本发明的发明人曾经使用Teflone管埋植于人或动物皮下，获得组织管，将获得的组织管去细胞，并用肝素进行表面修饰，得到了生物相容性较好的人造血管，然而，该方法得到的人造血管在长久保持通畅率方面没有能做到最好。

因此，需要一种使人造血管持久通畅的方法。

发明内容

发明人在研究过程中使用肝素替换肝素来修饰人造血管内表面，并增加了S-SDF-1处理后，出乎意料地发现，人造血管的能够在体内更持久地保持通畅。

为解决以上问题，本发明提供了一种使人造血管的持久保持通畅的试剂盒，包括脱细胞试剂和抗堵塞试剂组；

所述脱细胞试剂为包含6-10mmol/L CHAPS、20-30mmol/L EDTA二钠盐、0.10-0.15mmol/L NaCl和0.8-1.2mol/L NaOH的水溶液；

所述抗堵塞试剂组由A溶液、B溶液组织和C溶液，其中，所述A溶液为包含30-50mg/ml EDC和10-30mg/mL Sulfo-NHS的MES缓冲液，所述B溶液为包含75-90mg/ml肝素的MES缓冲液，所述C溶液为包含10-20μg/ml S-SDF-1的MES缓冲液。

在一个优选实施方案中，所述脱细胞试剂为包含8mmol/L CHAPS、25mmol/L EDTA二钠盐、0.12mmol/L NaCl和1mol/L NaOH。