[发明专利]一种魟鱼软骨多糖的制备方法在审
| 申请号： | 201710697660.3 | 申请日： | 2017-08-15 |
| 公开（公告）号： | CN107501439A | 公开（公告）日： | 2017-12-22 |
| 发明（设计）人： | 李冰 | 申请（专利权）人： | 浦江县欧立生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C08B37/08 | 分类号： | C08B37/08 |
| 代理公司： | 北京华仲龙腾专利代理事务所(普通合伙)11548 | 代理人： | 李静 |
| 地址： | 322200 浙江省*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 软骨 多糖 制备 方法 | ||
1.一种魟鱼软骨多糖的制备方法，包括预处理；细胞破碎；多糖提取；多糖柱层析；冷冻干燥，其特征在于：所述细胞破碎：取魟鱼软骨粉末过筛，制成溶液固液比1:60~80并加入软骨重量0.4%~0.6%的活性多肽，选用磷酸钠盐缓冲液pH=6.7~7.0作为提取剂，反复冻融，梯度超声波辅助冻融，离心，得粗蛋白提取液。
2.根据权利要求1所述的一种魟鱼软骨多糖的制备方法，其特征在于：所述预处理步骤为：取新鲜魟鱼软骨，干燥处理，粉碎，过50-70目筛网，石油醚除脂，得脱脂魟鱼软骨粉末。
3.根据权利要求1所述的一种魟鱼软骨多糖的制备方法，其特征在于：所述活性多肽的氨基酸序列为HSHACASYYCSKFAACGTASCTHYPGKLCACVNCSR。
4.根据权利要求1所述的一种魟鱼软骨多糖的制备方法，其特征在于：所述细胞破碎步骤中反复冻融是在-20℃和37℃，反复冻融3-4次，每次3-4h，梯度超声波功率为500-700w，时间为15-20min，每隔10~20min超声波功率增强10~20w，直至反复冻融结束。
5.根据权利要求1所述的一种魟鱼软骨多糖的制备方法，其特征在于：所述多糖提取步骤为：将粗蛋白提取液旋蒸浓缩，乙醇醇沉，离心得粗多糖，复溶，加入三氯乙酸脱蛋白，透析，透析袋的透过分子量为3500-5000Da，乙醇醇沉，沉淀物真空冷冻干燥，得软骨粗多糖。
6. 根据权利要求1所述的一种魟鱼软骨多糖的制备方法，其特征在于：所述多糖柱层析步骤为：将软骨多糖配成水溶液，上tris缓冲液预平衡DE52纤维素离子交换柱3.5×25cm，蒸馏水洗脱，NaCl溶液梯度洗脱，收集洗脱液，将洗脱液分经Sephacryl S-400柱层析1.6cm×80cm，NaCl洗脱，收集洗脱液真空浓缩，透析。
7.根据权利要求1所述的一种魟鱼软骨多糖的制备方法，其特征在于：所述冷冻干燥温度为-40℃至-38℃。
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