[发明专利]一种合相色谱‑串联质谱法测定无烟气烟草制品中降烟碱对映异构体含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于理化分析技术领域，具体涉及一种合相色谱-串联质谱法测定无烟气烟草制品中降烟碱对映异构体含量的方法。

背景技术

降烟碱是无烟气烟草制品中的主要生物碱之一，对无烟气烟草制品品质有重要影响，并是烟草特有亚硝胺——亚硝基降烟碱（NNN）的前体物质。降烟碱分子含有一个手性中心，所以降烟碱有两个对映体：S-(-)-降烟碱（简称S-降烟碱）和R-(+)-降烟碱（简称R-降烟碱）。根据对映异构体的特性，降烟碱的两个对映对映体可能具有完全不同的代谢机理和生理特性。因此，有必要对无烟气烟草制品中降烟碱的对映异构体含量进行分析测定。

目前，文献报道降烟碱对映异构体的测定方法主要有气相色谱-质谱联用法（GC-MS，Beiträge Zur Tabakforschung. 2013;25(7):649-659. Chirality. 1999;11(1):82-84.）、多维气相色谱-质谱联用法（MDGC-MS，J. Chromatogr. B. 2008;865(1):13-17.）、毛细管电泳法（CE，Electrophoresis. 2009;30(2):349–356.）等，但是，GC-MS和MDGC-MS需要在前处理过程中进行衍生化，费时费力，CE仅使用保留时间进行定性，定性能力相对较差，容易出现假阳性结果。因此有必要开发一种灵敏度高、精密度好、适合大批量准确定量无烟气烟草制品中S-降烟碱和R-降烟碱的方法。

发明内容

本发明的目的正是基于上述技术不足，建立了一种合相色谱-串联质谱法测定无烟气烟草制品中降烟碱对映异构体含量的方法。本方法在前处理过程中不需要衍生化过程，实现了S-降烟碱和R-降烟碱的基线分离，并使用二级质谱进行定性和定量，避免出现假阳性结果，所以，本方法具有操作简便、灵敏度高、准确定好等优点。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

将无烟气烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用二氯甲烷萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用串联手性柱-合相色谱-串联质谱法分析，采用峰面积归一化法定量检测无烟气烟草制品中S-降烟碱和R-降烟碱的比例。

具体步骤如下：

1. 标准溶液的配制

称取约100.0 mg的S-(-)-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的S-(-)-降烟碱标准储备液；称取约100.0 mg的R-(+)-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度约为2.0 mg/mL的R-(+)-降烟碱标准储备液；利用S-(-)-降烟碱标准储备液和R-(+)-降烟碱标准储备液稀释配制S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱浓度分别为100 μg/mL和100 μg/mL的混合标准溶液

2. 无烟气烟草制品样品的混匀

将无烟气烟草制品样品置于40 ℃烘箱中，1小时后将无烟气烟草制品取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛。

3. 无烟气烟草制品样品的萃取

选择正己烷、甲基叔丁基醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷五种溶剂进行萃取效率的比较。结果发现，二氯甲烷对降烟碱的萃取效率最高，甲基叔丁基醚和乙酸乙酯次之，正己烷和三氯甲烷的萃取效率最差，故选择二氯甲烷为最终的萃取溶剂。

优化的萃取步骤为：

称取0.3 g已粉碎的样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5%的氢氧化钠溶液（质量比），涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品，取10 mL二氯甲烷到离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min。

4. 萃取液的净化

取1.5 mL上清液于2 mL净化离心管中（内含150 mg无水硫酸镁，50mg PSA吸附剂，25 mg GCB吸附剂，统称基质分散固相萃取材料），于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min。取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进液相分析。

5. 串联手性柱-合相色谱-串联质谱法条件