[发明专利]一种合相色谱‑串联质谱法测定无烟气烟草制品中降烟碱对映异构体含量的方法

权利要求书

1.一种合相色谱-串联质谱法测定无烟气烟草制品中降烟碱对映异构体含量的方法，其特征在于：将无烟气烟草制品样品干燥、粉碎和过筛，样品经过氢氧化钠溶液浸润后，采用二氯甲烷萃取，萃取液经基质分散固相萃取净化后，使用手性柱-合相色谱-串联质谱分析，采用峰面积归一化法定量检测无烟气烟草制品中S-降烟碱和R-降烟碱的比例，具体步骤如下：

（1）标准溶液的配制：称取100.0 mg的S-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为2.0 mg/mL的S-降烟碱标准储备液；称取100.0 mg的R-降烟碱标准品，用甲醇溶液稀释定容到50 mL棕色容量瓶中，配制成浓度为2.0 mg/mL的R-降烟碱标准储备液；利用S-降烟碱标准储备液和R-降烟碱标准储备液稀释配制S-降烟碱和R-降烟碱浓度分别为100 μg/mL和100 μg/mL的混合标准溶液；

（2）无烟气烟草制品样品的混匀：将无烟气烟草制品样品置于40 ^oC烘箱中，1小时后将无烟气烟草制品取出，粉碎后过0.45毫米孔径标准筛；

（3）无烟气烟草制品样品的萃取：称取0.3 g已粉碎的样品于15 mL具塞离心管中，加入2.0 mL 5% 的氢氧化钠溶液，涡旋1 min混匀后静置10 min浸润样品；取10 mL二氯甲烷到上述具塞离心管中，并于旋涡混合器上以4000 rpm速度振荡30 min；

（4）萃取液的净化：取1.5 mL萃取上清液于2 mL内含有基质分散固相萃取材料的净化离心管中，于旋涡混合器上以4000 rpm振荡2 min，以10000 rpm离心1 min，取上清液过0.45 μm有机相滤膜后进液相分析；

（5）串联手性柱-合相色谱串联质谱法条件：分析柱1为Trefoil CEL1柱，柱长 150 mm ，内径3.0 mm ，固定相粒径2.5 µm，分析柱2为Chiralcel OD-H液相色谱柱，柱长 250 mm ，内径4.6 mm ，固定相粒径5 µm；流动相A为：CO2，流动相B：含0.05%异丙胺的甲醇；流速为1.0 mL/min；梯度洗脱条件为：0.0 min，97% A；0.5 min，97% A；8.0 min，92% A；12.0 min，92% A； 30.0 min，90% A；柱温40 ℃；进样室温度：10 ℃；进样体积2 μL；背压：1600 psi；ISM补偿流路流动相为含0.1%甲酸的甲醇，流速为0.3 mL/min；分析时间总计30 min；质谱条件：离子源：电喷雾源，扫描方式为正离子扫描，离子源温度为300 ℃，电喷雾电压为5000 V，雾化气压力为40 psi；检测方式：多反应监测（MRM）；通过对峰面积进行归一化定量S-降烟碱和R-降烟碱占总降烟碱的比例。

2.根据权利要求1所述的合相色谱-串联质谱法测定无烟气烟草制品中降烟碱对映异构体含量的方法，其特征在于：步骤（4）中所述的基质分散固相萃取材料含：150 mg无水硫酸镁，50 mg PSA吸附剂，25 mg GCB吸附剂。