[发明专利]一种脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法

权利要求书

1.一种脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：包括以下步骤：

(1)取脐血造血干细胞，经过离心后，倒掉上层清液；

(2)将步骤(1)得到的液体放入冻存液中，吹打均匀，形成细胞悬液，装入无菌细胞冻存管中；

(3)对无菌细胞冻存管采用梯度降温冷冻法进行冻存。

2.根据权利要求1所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述步骤(3)具体为：将无菌细胞冻存管置于冰块中1-3h，然后取出，置于干冰中放置12-24h，之后取出，放置于液氮中冻存。

3.根据权利要求1所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)的细胞悬液中，细胞浓度为5-20×10⁶个/mL。

4.根据权利要求1所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)中，冻存液由冻存保护剂、胎牛血清、培养基组成；

所述培养基由以下组分组成：

基础培养基、人血清白蛋白、杨梅素、三七总皂苷、大黄素、亚油酸、胰蛋白酶、抑肽酶、光蛋白聚糖、碱性成纤维细胞生长因子、丙酮酸、L-谷氨酰胺、叶酸、β-巯基乙醇、黄芪多糖、转铁蛋白、维生素、氨基酸。

5.根据权利要求4所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述步骤(2)中，所述培养基中，各组分的含量如下：

基础培养基10-50g/L，人血清白蛋白5-20g/L，杨梅素5-20mg/L，三七总皂苷5-20mg/L，大黄素5-20mg/L，亚油酸2-10mg/L，胰蛋白酶1-10mg/L，抑肽酶4-10mg/L，光蛋白聚糖5-20μg/L，碱性成纤维细胞生长因子1-10μg/L，丙酮酸5-15mg/L，L-谷氨酰胺5-20mg/L，叶酸1-15mg/L，β-巯基乙醇2-10mg/L，黄芪多糖50-80mg/L，转铁蛋白1-10mg/L，维生素80-500mg/L，氨基酸80-500mg/L。

6.根据权利要求5所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述人血清白蛋白为人脐血人血清白蛋白；基础培养基为IMDM培养基；所述维生素为水溶性维生素；所述氨基酸为多种氨基酸复合物。

7.根据权利要求4所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述冻存保护剂为渗透性冷冻保护剂，由甘油、二甲基亚砜、乙二醇、丙二醇、乙酰胺、甲醇的一种或多种组成。

8.根据权利要求4所述的脐血造血干细胞的梯度降温冻存方法，其特征在于：所述冻存保护剂、胎牛血清、培养基的体积比为1：1～3：2～4。