[发明专利]生菜作为宿主在表达血清白蛋白中的应用在审
| 申请号： | 201710667745.7 | 申请日： | 2017-08-07 |
| 公开（公告）号： | CN109385442A | 公开（公告）日： | 2019-02-26 |
| 发明（设计）人： | 王跃驹;马洁 | 申请（专利权）人： | 北京睿诚海汇健康科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/82 | 分类号： | C12N15/82;C07K14/765 |
| 代理公司： | 北京集佳知识产权代理有限公司 11227 | 代理人： | 张柳;赵青朵 |
| 地址： | 102104 北京市*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 血清白蛋白 生菜 宿主 生物技术领域 免疫印迹法 农杆菌介导 农杆菌侵染 生物学活性 表达体系 活性重组 外源蛋白 真空渗透 重组载体 低成本 应用 细胞 成功 生产 | ||
1.生菜作为宿主在表达血清白蛋白中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
3.一种表达载体，其特征在于，包括血清白蛋白的核苷酸序列和双元植物载体。
4.根据权利要求3所述的表达载体，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
5.根据权利要求3或4所述的表达载体，其特征在于，其构建方法包括如下步骤：
步骤1：在血清白蛋白的核苷酸序列的5’末端分别加入Xbal限制性酶切位点，在3’末端分别加入Sacl限制性酶切位点；
步骤2：克隆到载体pUC57载体中，获得克隆载体pUC-HSA；
步骤3：通过Xbal/Sacl从步骤2所得的克隆载体pUC-HSA中获得基因片段HSA，克隆至双元植物载体pCam35S，获得表达载体p35S-HSA。
6.根据权利要求3至5任一项所述的表达载体在表达血清白蛋白中的应用。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
8.一种生菜作为宿主表达血清白蛋白的方法，其特征在于，将如权利要求3至5任一项所述的表达载体转化到农杆菌中，通过农杆菌介导真空渗透入生菜组织后，提取、分离蛋白质，获得血清白蛋白。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述血清白蛋白为人血清白蛋白。
10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述农杆菌介导真空渗透包括如下步骤：
步骤1：抽真空25～45s；
步骤2：保持真空-95kPa压力30～60s；
步骤3：释放压力使得渗透液渗入所述植物组织；
重复上述步骤2～3次，避光处理4d。
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