[发明专利]一种蚕砂中果胶的提取及其含量测定方法

权利要求书

1.一种蚕砂中果胶的提取方法，其特征在于包括以下步骤：

1）对蚕砂进行风力筛选，清除其中的杂质后，再加水漂洗处理；

2）蚕砂清洗后加水软化，加水量为蚕砂重量的30-40%，使蚕砂充分被水浸润4~6h，期间翻动2~3次，软化程度以将蚕砂手捏即散，但捏不出水为准；

3）对蚕砂用丙酮提取叶绿素，提取后取滤渣，加入其质量3-4倍的水，微波处理10-20 min，在55-65℃下干燥40-50h，干燥后粉碎，过60-100目筛，备用；

4）配制LB培养基；

5）称取步骤3）所得的蚕砂粉9-11g，放入锥形瓶中，加入95-105mL的1-(2-甲基)烯丙基-3-甲基咪唑氯盐离子液体，再添加0.4-0.6wt%的PEG修饰的纤维素酶，在40-50℃下处理50-70min，放入85-95℃的水浴中加热4-6 min，加入35-45mL的LB培养基，并接种350-450微升的黑曲霉菌液，在30-40℃下发酵20-30h；

6）吸取发酵后的提取液进行离心处理，吸取上清液，经活性炭脱色100~120min，在60~70℃下利用真空滤膜浓缩，浓缩后迅速冷却至室温，加入2-4倍上清液质量的无水乙醇后进行离心处理，洗涤两次，再用60-65wt%的乙醇洗涤两次，使果胶从溶液中呈絮状析出，在40~60℃水浴中静置10-14h，待果胶完全沉淀后抽滤，得到粗制果胶滤饼；

7）将抽滤得到的粗制果胶滤饼溶解于18-22倍热水中后进行过滤，滤液用分析纯氨水调节pH至3-4，用旋转蒸发仪进行浓缩后用94-96wt%的乙醇沉析，滤饼用无水乙醇洗涤，最后得到精制的果胶。

2.如权利要求1所述的一种蚕砂中果胶的提取方法，其特征在于，步骤4）中，所述LB培养基的制备方法为：分别称取胰蛋白胨9-11g，酵母提取物4-6g，氯化钠9-11g，用去离子水定容至1000 mL。

3.如权利要求1所述的一种蚕砂中果胶的提取方法，其特征在于，步骤6）中，对提取液进行离心处理时离心速率为8000-12000r/min，离心时间为4-6min。

4.如权利要求1所述的一种蚕砂中果胶的提取方法，其特征在于，步骤6）中，对上清液进行离心处理时离心速率为8000-12000r/min，离心时间为2-4min。

5.如权利要求1所述的一种蚕砂中果胶的提取方法，其特征在于，步骤7）中，所述热水的温度为55-65℃。

6.一种如权利要求1-5之一所述方法提取的果胶的含量测定方法，其特征在于包括以下步骤：

A）精制乙醇：取化学分析无水乙醇1000 mL，加入锌粉4g和硫酸4 mL，置于恒温水浴回流9-11 h后，用旋转蒸发仪蒸馏，馏出液每1000 mL，加入锌粉和氢氧化钾各4g，进行重蒸馏；

B）配制0.15wt%咔唑乙醇溶液：称取0.15 g的咔唑，溶解于精制乙醇中，定容至1000 mL；

C） 配制1mg/mL的半乳糖醛酸溶液：准确称取半乳糖醛酸100mg，溶解于水中，加入0. 4-0.6mol的氢氧化钠，并定容至100 mL，混匀；

D）将1mg/mL半乳糖醛酸溶液经过咔哩硫酸法显色后，以未加标准液为空白，在波长200 -800 nm的范围内，用紫外光分光光度计进行扫描；

E）准确移取1 mg/mL半乳糖醛酸溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5. 0，6.0，7.0 mL分别注入容量瓶中，分别稀释至10，20，30，40，50，60，70，80μg/mg，分别得到半乳糖醛酸标准液，用咔唑硫酸法测定吸光度，以半乳糖醛酸标准溶液浓度为横坐标，以标准溶液的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线；

F）将精制的果胶用1mL 0. 5 mol/L氢氧化钠溶液溶解，采用咔唑硫酸比色法测定其中的果胶含量。