[发明专利]一种大花六道木的组织培养方法

权利要求书

1.一种大花六道木的组织培养方法，包括以下步骤：

1)准备外植体

选取大花六道木的带腋芽茎段作为外植体，清洗后消毒，再冲洗干净，备用；

2)初代培养

将长度为0.5-1cm的带腋芽茎段，接入初代培养基中培养20-30天，从腋芽处长出枝条；

培养条件：白天培养温度为25-26℃，夜间培养温度23-24℃，光照时间14～16小时，光照强度为2000-3000勒克斯；

所述初代培养基以WPM培养基为基本培养基，并添加了6-苄基腺嘌呤1.5-2mg/L和萘乙酸0.01-0.02mg/L；

3)增殖培养

切下长1-2cm的枝条，接入增殖培养基中进行增殖培养，培养周期为50-60天，培养条件同步骤2)，得到增殖的茎段；

所述的增殖培养基以WPM培养基为基本培养基，并添加6-苄基腺嘌呤0.8-1.2mg/L和萘乙酸0.1-0.2mg/L；

4)生根培养

将2-3cm的茎段切下接入生根培养基中，培养20-30天后生根，得到生根苗，培养条件同步骤2)；

所述生根培养基以WPM培养基为基本培养基，并添加吲哚丁酸0.5-1mg/L和萘乙酸1-1.5mg/L；

5)炼苗、移栽

打开培养生根苗的培养瓶瓶盖，室温下炼苗2-3天，移栽至基质中，保持温度20-26℃，保湿、遮荫培养2-3天，得到幼苗。

2.根据权利要求1所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤1)中，所述外植体来自田间种植的大花六道木，选取当年萌发出的带腋芽的茎段为外植体，茎段长度为5-7cm。

3.根据权利要求1所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，在步骤3)中，进行增殖培养的茎段，在20-30天的时候，将长度大于2cm的枝条切分成含芽的茎段，转接入新鲜的增殖培养基，继续培养20-30天。

4.根据权利要求1所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤2)-4)中所述初代培养基、增殖培养基和/或生根培养基中添加蔗糖20-30g/L、琼脂6-8g/L，培养基pH值为5.6-5.8。

5.根据权利要求1所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤3)、4)中所述增殖培养基和/或生根培养基中添加活性炭0.4-0.6g/L。

6.根据权利要求1所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤1)中，消毒过程为：用流水冲洗1-2小时后，用0.1％生汞消毒8-12分钟，或者先用70％的酒精消毒30-60秒，再用2％次氯酸钠消毒10-15分钟，冲洗。

7.根据权利要求6所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤1)中，在消毒时，消毒液中加入吐温-20溶液。

8.根据权利要求1-6任一项所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤4)所述生根培养基中添加抗坏血酸0.3-0.6g/L。

9.根据权利要求1-7任一项所述大花六道木的组织培养方法，其特征在于，步骤5)中所述基质为：草炭土：珍珠岩＝3-4：1，体积比。