[发明专利]一种原位生成硫化银竞争型黄曲霉毒素光电化学传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种原位生成硫化银竞争型黄曲霉毒素光电化学传感器的制备方法，其特征在于，包括以下几个步骤：

（1）将ITO导电玻璃切割至2.5cm × 1.0cm大小，依次用丙酮、乙醇和超纯水清洗30min，氮气吹干；

（2）取10 µL、3 ~ 5 mg/mL的WO₃滴加到导电玻璃的导电面，室温下晾干，300℃煅烧120min，冷却到室温，在WO₃修饰电极表面滴加3~ 5 µL、0.1mol/L的巯基乙酸，室温下晾干，滴加3 ~ 5μL的EDC/NHS混合液，4 ℃冰箱中干燥，超纯水冲洗；

（3）将4~ 6 µL、10 µg/mL的黄曲霉毒素抗原滴加到电极表面，4 ℃冰箱中干燥，超纯水冲洗；

（4）继续将2 ~ 4µL、质量分数为1%的BSA溶液滴加到电极表面，以封闭电极表面上非特异性活性位点，4 ℃冰箱中晾干，超纯水冲洗电极表面；

（5）将5µL、10 pg/mL~ 60 ng/mL黄曲霉毒素与银离子功能化八面体钒酸铋黄曲霉毒素抗体标记物的混合液滴加到电极表面，4℃冰箱中孵化30min，继续滴加3 µL、0.08mol/L的Na₂S，4 ℃冰箱中晾干，超纯水冲洗电极表面，制得一种原位生成硫化银竞争型黄曲霉毒素光电化学传感器；

所述EDS/NHS混合液是指含有1×10^-2mol/L 的1-乙基-3-(3-二甲基氨丙基)碳二亚胺和2×10^-3mol/L的N-羟基琥珀酰亚胺的混合水溶液。

2.如权利要求1所述的一种原位生成硫化银竞争型黄曲霉毒素光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述WO₃的制备，步骤如下：

取10 ~ 12 mmol钨酸钠溶解于20 mL超纯水，用4mol/L的盐酸将pH调节到1.5，加入20~ 24 mmol氯化钠和10 ~ 12 mmol草酸，搅拌30 min后，再加入50 mL超纯水，然后转移到聚四氟乙烯高压反应釜中，150 ℃下反应2~ 3h，冷却至室温，离心分离，分别用超纯水和无水乙醇离心洗涤，80℃真空干燥12 h，制得WO₃粉末。

3.如权利要求1所述的一种原位生成硫化银竞争型黄曲霉毒素光电化学传感器的制备方法，其特征在于，所述银离子功能化八面体钒酸铋黄曲霉毒素抗体标记物溶液的制备，包括以下步骤：

（1）八面体钒酸铋的制备

取3.6mmol的硝酸铋溶于30~ 35mL、2.4 mol/L硝酸，形成溶液A；取3.6mmol偏钒酸铵溶于30~ 35 mL、1.9 mol/L氢氧化钠，形成溶液B；在A、B两溶液中分别加入0.6 g十二烷基苯磺酸钠，分别搅拌30 min，将A、B两溶液依次转移到聚四氟乙烯高压釜中混合，200℃下反应3 ~5 h，冷却至室温，离心分离，用超纯水和无水乙醇离心洗涤三次，80℃真空干燥18~ 22h，得到八面体钒酸铋；

（2）银离子功能化八面体钒酸铋黄曲霉毒素抗体标记物溶液的制备

称取15 ~ 25mg上述制得的八面体钒酸铋溶于2 mL、0.1mol/L的巯基乙酸，超声20min，加入7.5 ~ 8.5 mL、20mmol/L的硝酸银，室温水浴暗处振荡12h；加入500 μL的EDC/NHS混合液，振荡2h；离心洗涤，用pH 7.0的PBS的缓冲溶液分散，加入1mL、10 µg/mL黄曲霉毒素抗体振荡24h；离心洗涤，分散在2 mL、含质量分数为1.0% BSA的pH 7.0的PBS溶液中，制得银离子功能化八面体钒酸铋黄曲霉毒素抗体标记物溶液，4 ℃冰箱中储存以备用。