[发明专利]一种化学成分确定的细胞培养基及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种化学成分确定的培养基及其应用。本发明提供了一种培养基添加物，并提供了含有该添加物的化学成分确定的培养基，实验结果表明，本发明提供的添加物能够替代血清，且在促进细胞生长方面更有优势。其适用于培养多种细胞，特别适合用于培养神经细胞，从而避免神经细胞与血清接触，做大限度的模拟体内细胞生长环境，还适用于培养成纤维细胞，从而避免成纤维细胞在转化医学应用时刺激机体产生抗体的可能。本发明提供的添加物性质稳定，4℃环境可稳定保存3～4个月。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，尤其涉及一种化学成分确定的细胞培养基及其应用。

背景技术

使用添加血清的培养基进行细胞培养已有漫长历史。血清中含有细胞培养所需的多种营养成分和因子，但是，目前，市面上的血清种类繁多，例如，根据血源产地，可分为：国产血清、进口血清(澳洲来源、新西兰来源等)；根据种属，可分为：牛血清、马血清等；根据动物的年龄，例如，可分为：胎牛血清、小牛血清等。实际应用中，面对多种商品化的血清很难确定哪一种更加适用；并且，由于血清品质受到血源物种的身体状况影响，即便同一种来源的血清也存在不同批次组分差异较大的现象，从而导致实验难以很好的重复；另外，有些商品化的血清会因特殊疾病疯牛病引起血清的进口受限等。尽管血清存在缺点，但使用血清有诸多益处，因此，它们已广泛存在许多细胞培养的应用之中。

对科学研究及临床研究而言，实验条件的稳定性与可控性是实验成功与否的关键因素。血清来源广，成分复杂且不明确，批次间差异大，对实验目标的影响无法确定，使科研及临床研究重复性差，影响实验结果。

由于血脑屏障的存在，有些细胞在生物体内实际是不与血清接触的，例如：神经细胞；神经细胞包括神经元(neurons)和星形胶质细胞(astrocytes，AST)，在中枢神经系统活动中发挥重要作用。体外培养神经细胞是对大脑功能研究的重要手段。但这些细胞在进行体外培养研究时，如采用含有血清的培养基进行培养，虽然能够保证其具有较高的活性，但却无法真实的模拟体内的环境。

皮肤成纤维细胞不仅在创伤修复方面发挥着重要的功能，由成纤维细胞重编程得到诱导多能干细胞，可诱导分化成多种细胞，例如：神经细胞、心肌细胞等，为疾病的治疗提供了新途径。对转化医学而言，血清中存在的多种抗原，使用添加血清培养基培养出来的细胞进行在体实验时，存在刺激机体产生抗体的可能，使科研成果应用到临床遥不可及。

使用化学成分确定的培养基的益处包括：减少血清批次间差异造成的实验批间差异，最大程度地增加实验条件的稳定性与可控性。因此，本领域需要一种化学成分确定的细胞培养基，使细胞培养的效果不劣于添加血清培养基，且能够使实验条件更加严格可控，对脑内神经细胞的研究可能会有重大改变，成纤维细胞在转化医学各方面的应用更加安全。

发明内容

有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种化学成分确定的细胞培养基及其应用；本发明提供的添加物用于细胞的培养，能够取得优于或相当于添加血清进行培养的效果。

本发明提供的添加物包括如下质量份的：

肝素-表皮生长因子

样生长因子 2.5×10^-4～2.5×10^-2份。

本发明提供的添加物在细胞培养中的应用。

本发明提供的添加物化学成分明确，能够避免血清对培养细胞造成的一系列不利影响，例如：血清对细胞的毒性作用，使细胞发生基因改变等；使用该添加物能够使实验条件更加稳定、可控，从而使因血清选择及批次间差异而造成的实验可重复性差的弊端得以消除。

本发明提供的添加物可为粉末状固体，也可以溶液形式存在，本发明对此不做限定。其中各组分皆可于市场购得。当其以溶液形式存在时，每5ml溶液中包括：