[发明专利]一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒

说明书

本发明公开了一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒，其特征在于，试剂盒包括包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒、酶标记的肌红蛋白抗体、肌红蛋白校准品、化学发光底物，所述纳米磁微粒的粒径为20～40nm，所述酶为辣根过氧化物酶。本发明提供的肌红蛋白测定试剂盒检测简单而快速、抗干扰能力强，同时具有检测结果准确性和稳定性以及灵敏度高等优点。

技术领域

本发明属于免疫检测领域，具体地，涉及一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒。

背景技术

肌红蛋白(Myoglobin)是骨骼肌和心肌特异性氧结合蛋白。分子量为16700，由一条含有153个氨基酸残基的多肽链和一个血红素辅基构成，呈紧密球形。

由于肌红蛋白分子量小，当肌细胞受损时，肌红蛋白会释放至循环系统中，1～2小时升高，12小时达到峰值，24小时后逐渐下降，是早期诊断急性心肌梗塞等疾病的重要参考指标。

目前肌红蛋白的免疫检测方法主要有胶体金免疫层析法、酶联免疫测定法和化学发光免疫测定法等。胶体金免疫层析法具备操作简便、快捷、可单份检测、便于保存、不需要特殊设备等优点，但由于灵敏度不高，难以实现定量等缺点限制了这种方法的使用。酶联免疫测定法由于具备操作简单，试剂有效期长，无污染、高于胶体金的敏感性、特异性好、结果可用仪器测定等特点，但由于敏感性相对较低，所用标记酶与底物可定量测定范围窄及仪器测定范围窄等缺点，限制了其在微量免疫定量测定中的应用。

化学发光免疫测定法起步于80年代初，快速发展应用于90年代，为当今最为敏感的微量免疫测定法。主要特点是高敏感性、可测定浓度范围宽、样品无需稀释即可检测、试剂有效期长、操作简单、检测自动化程度高、数据自动生成处理能力强、测定仪器兼容性好、无环境污染等，因而得到了迅速发展与应用。但是检测灵敏度、测值准确度、稳定性、抗干扰能力等方法仍需进一步加强。

发明内容

本发明的目的在于克服现有的化学发光免疫测定法仍然存在检测灵敏度、准确度、稳定性、抗干扰能力等方面仍然存在问题的缺陷，提供一种新的肌红蛋白测定试剂盒。

为了实现上述目的，本发明提供一种用于检测肌红蛋白的测定试剂盒，其中，试剂盒包括包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒、酶标记的肌红蛋白抗体、肌红蛋白校准品、化学发光底物、缓冲溶液，所述纳米磁微粒的粒径为20～40nm，所述酶为辣根过氧化物酶。

肌红蛋白校准品可以通过市售获得，也可以是自行配制；其中包含已知浓度的肌红蛋白。标准品目的在于绘制一条标准曲线。因此，任何可以覆盖检测范围的校准品浓度都可以使用。肌红蛋白的浓度例如可以为0、10、50、100、300、800、1500、2000ng/ml等的人肌红蛋白。

在本发明中，优选情况下，包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒的制备方法包括：将纳米磁微粒与活化剂在缓冲溶液中接触，然后与肌红蛋白抗体偶联得到包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒，所述活化剂为碳二亚胺。

在本发明中，优选情况下，包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒的制备方法包括：

1)将纳米磁微粒用MES缓冲液分散，使纳米磁微粒的浓度为10～30mg/mL；

2)将碳二亚胺加入至步骤1)的溶液中，搅拌加入肌红蛋白抗体，室温下搅拌过夜；

3)将纳米磁微粒与反应体系分离后用MES缓冲液分散，加入1％BSA封闭液，室温封闭反应2～4小时，将纳米磁微粒分离；

4)将步骤3)分离的纳米磁微粒用pH7.4的Tris-HCl缓冲液分散，使纳米磁微粒的浓度为5～20mg/mL，得到包被有肌红蛋白抗体的纳米磁微粒。

在本发明中，优选情况下，纳米磁微粒的制备方法包括以下步骤：