[发明专利]腺苷在制备雌激素类药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及医药领域，特别是一种腺苷在制备雌激素类药物中的应用。

背景技术

植物雌激素存在于一些天然植物中，具有雌激素样作用。植物雌激素可与体内雌激素受体和雌激素相关受体结合起到双向调节雌激素受体作用，显示出雌激素样活性。在体内雌激素水平较低时有拟雌激素样作用；当体内雌激素水平较高时，可通过竞争性与雌激素受体结合，抑制内源性雌激素的作用而产生抗雌激素活性。因此，植物雌激素被称为天然的选择性雌激素受体调节剂。天然的植物雌激素相比于合成的雌激素，其雌激素样活性要低，但是所引起的乳腺癌、子宫内膜癌等副作用也更少，使用会更安全。因此对植物雌激素的研究逐渐成为热点。

腺苷，指由腺嘌呤的N-9与D-核糖的C-1通过β糖苷键连接而成的化合物，其磷酸酯为腺苷酸。腺苷是一种遍布人体细胞的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸，参与心肌能量代谢，同时还参与扩张冠脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其它系统及组织均有生理作用。腺苷能使房室结传导减慢，阻断房室结折返途径，阵发性室上性心动过速(PSVT)(伴或不伴预激综合征)患者恢复正常窦性心律，而腺苷的雌激素样作用的研究未见报道。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种腺苷在制备雌激素类药物中的应用，即腺苷的新用途，可有效用于雌激素类药物的制备。

本发明解决的技术方案是，达到雌激素样作用的腺苷给药量不低于50mg/kg/d。

本发明开辟了腺苷的新用途，有效用于雌激素类药物的制备，解决由于体内雌性激素分泌不足而引起的相关疾病，是药物上的创新。

具体实施方式

以下结合试验资料对本发明的具体实施方式作进一步详细说明。

本发明首次发现腺苷具有雌激素样作用，有关试验资料如下：

1实验材料

1.1实验药物

腺苷(索莱宝A8240)。

1.2实验动物与细胞株

清洁级昆明种小鼠，雌性，出生21天(刚断乳)，体重9～12g，购自于北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京)2016-0011。人乳腺癌细胞(MCF-7)购自中国医学科学院基础医学研究所细胞资源中心。

1.3仪器与试剂

戊酸雌二醇片(拜耳医药)；酶标仪(BIO-RAD 680)；ZRD-7080全自动新型鼓风干燥箱(上海智城分析仪器制造有限公司)；微量加样器(Nichipet EX PLUS)；AB204-N电子读数分析天平(梅特勒-托利多仪器(上海)有限公司产品)；10cm培养皿、96孔培养板、冻存管(Corning)；普通手术器械；90-3磁力搅拌器(上海振捷实验设备有限公司)；倒置显微镜(NIKON ECLIPSE TS100)；二氧化碳培养箱(STIK)；SORVALL ST16R Centrifuge高速低温冷冻离心机(Thermo Fisher Scientific公司)。

2实验方法

2.1小鼠子宫增重实验

将小鼠按体重均衡和随机的原则分组，持续给药7天。正常组每日蒸馏水0.02mL/g灌胃；阳性对照组隔日灌胃戊酸雌二醇(0.33mg/kg/d)灌胃；腺苷0.5mg/10g/d，配成水溶液，每日按0.02mL/g灌胃。最后一次给药24h后，摘眼球取血，脱颈椎处死小鼠，立即摘取子宫称重，计算子宫系数[子宫湿重×(体重)^-1×100％]。实验平行重复三次。结果与正常组相比，计算P值，考察有无统计学意义。

2.2MCF-7细胞增殖实验

MCF-7细胞经含5％去雌激素胎牛血清的无酚红DMEM培养基培养1周后，选取对数生长期细胞，PBS洗两次，用0.05％胰蛋白酶消化后，加入无酚红DMEM培养基吹打均匀，以2×10⁴个/mL的浓度接种于96孔板内，每孔培养总体积为200μL。培养24h待细胞贴壁后，换为腺苷培养液(5μM)继续培养。37℃、5％CO₂培养48h后，每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，37℃继续培养4h，小心吸净培养液，每孔加入150μLDMSO，震荡5-10min，使紫色结晶完全溶解。用酶标仪在490nm下测定各孔吸光度值(A)，计算平均A值和细胞活力。实验平行重复三次。

细胞活力＝各组OD值/正常组OD值

2.3ICI182,780拮抗实验