[发明专利]一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，该方法为：所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示，将核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示的壳聚糖酶基因构建至表达载体中，然后导入毕赤酵母细胞，诱导并获得分泌表达的壳聚糖酶；所述表达载体为pGBG1，表达载体pGBG1通过如下方式获得：

将表达载体pPIC9中的信号肽序列如SEQ ID NO. 4所示进行密码子优化，获得适合在毕赤酵母中表达的信号肽序列如SEQ ID NO. 5所示；

利用Nsi I/Xho I双酶切，将表达载体pPIC9中如SEQ ID NO. 4所示的序列替换为如SEQ ID NO. 5所示的信号肽序列，得到表达载体pGBG1。

2.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，其特征在于：所述毕赤酵母为GS115。

3.如权利要求1所述的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶的制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

（1）将核苷酸序列如SEQ ID NO. 2所示的壳聚糖酶基因进行全合成并构建至表达载体pGBG1中；

（2）对前述构建的表达载体进行酶切线性化后，舍弃含有抗性基因的片段，回收含有壳聚糖酶基因的片段；

（3）将前述获得的含有壳聚糖酶基因的表达载体导入毕赤酵母细胞GS115中，诱导培养，获得分泌表达的壳聚糖酶。

4.权利要求1所述方法制备的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶在壳聚糖降解中的应用。

5.权利要求4所述的枯草芽孢杆菌壳聚糖酶在壳聚糖降解中的应用，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶单独用于壳聚糖降解制备获得壳寡糖；或者所述枯草芽孢杆菌壳聚糖酶与其他壳聚糖酶或几丁质酶混合使用，协同降解壳聚糖或几丁质。