[发明专利]一种多倍体华石斛的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物多倍体培育技术领域，具体涉及一种多倍体华石斛的培育方法。

背景技术

华石斛(Dendrobium sinense)为兰科石斛属植物，是海南特有种，生于海拔1000米以上的高山云雾林中，常附生于树干上。华石斛集药用和观赏价值于一体，目前，已从华石斛中分离得到了一系列化合物，诸如芪类、生物碱类、多糖类等，具有显著抗肿瘤、抗氧化、抗菌等生物活性，是一种极具开发和推广利用前景的药用兰科植物。

华石斛对温度、湿度、光照等各种自然条件要求都非常高，种子在自然生境下萌发率较低；而通过人工引种驯化则受海拔和温度的限制；通过无菌播种可以获得大量组培幼苗，但幼苗生长纤弱，出瓶死亡率极高，以上原因都很大程度上影响了华石斛规模化、产业化的生产和市场化的要求。

发明内容

本发明的目的是提供一种多倍体华石斛的培育方法。

本发明提供了一种多倍体华石斛选育方法，包括如下步骤：使用液相的诱变剂对华石斛原球茎进行诱变处理；所述诱变剂中含有浓度为0.1-1g/L的秋水仙碱。

所述诱变剂中具体含有浓度为1g/L的秋水仙碱。

所述诱变剂中具体含有浓度为0.1g/L的秋水仙碱。

所述诱变剂中具体含有浓度为0.5g/L的秋水仙碱。

所述诱变剂中还含有浓度为15g/L的蔗糖。

所述诱变剂具体可为含0.1-1g/L秋水仙碱的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含1g/L秋水仙碱的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含0.1g/L秋水仙碱的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含0.5g/L秋水仙碱的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含0.1-1g/L秋水仙碱和14-16g/L蔗糖的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含1g/L秋水仙碱和15g/L蔗糖的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含0.1g/L秋水仙碱和15g/L蔗糖的液体1/2MS培养基。

所述诱变剂具体可为含0.5g/L秋水仙碱和15g/L蔗糖的液体1/2MS培养基。

进行所述诱变处理时，所述华石斛原球茎处于原胚期。

所述诱变处理条件可为：25℃、50r/min诱变处理2-10天。

所述诱变处理条件具体可为：25℃、50r/min诱变处理8天。

所述诱变处理条件具体可为：25℃、50r/min诱变处理10天。

所述诱变处理条件具体可为：25℃、50r/min诱变处理6天。

所述诱变处理条件具体可为：25℃、50r/min诱变处理4天。

所述诱变处理条件具体可为：25℃、50r/min诱变处理2天。

本发明还保护多倍体华石斛选育方法(方法A)，包括如下步骤：

(1)取华石斛原球茎，接种至诱变培养基中进行诱变处理；

(2)将步骤(1)处理后的原球茎接种至复壮分化培养基中培养，得到幼苗；

(3)从步骤(2)得到的幼苗中筛选得到多倍体华石斛幼苗。

本发明还保护多倍体华石斛选育方法(方法B)，包括如下步骤：

(1)取华石斛原球茎，接种至诱变培养基中进行诱变处理；

(2)将步骤(1)处理后的原球茎接种至复壮分化培养基中培养，得到幼苗；

(3)从步骤(2)得到的幼苗中筛选得到多倍体华石斛幼苗；

(4)栽培步骤(3)得到的多倍体华石斛幼苗，得到多倍体华石斛。

所述方法A或方法B中，所述步骤(1)中所述华石斛原球茎处于原胚期。

以上任一所述华石斛原球茎的制备方法为：将华石斛蒴果中散粉的种子接种至播种培养基中培养，得到华石斛原球茎。所述培养条件为：光照12h(温度：26℃，光照强度2000lx)/黑暗12h(温度：21℃)。所述培养时间为：30-50天，直至得到原胚期原球茎。

所述华石斛蒴果的选取原则为：从生长旺盛、茎秆粗壮、茎高长、分蘖多、开花数量大的华石斛植株上采集成熟度85％-90％的蒴果。