[发明专利]一种快速判定耐药型白色念珠菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药分析技术领域，具体地说，是一种快速判定耐药型白色念珠菌的方法。

背景技术

近年来，抗真菌药物的大量滥用导致了越来越严重的真菌耐药性。白色念珠菌，作为最常见的真菌，其产生的耐药型菌株引起的感染直接威胁着患者的生命。因此，亟需一种快速判定耐药型白色念珠菌的方法。

传统的细胞生物学方法包括酶联免疫组化，聚合酶链式反应等，这些方法需要复杂的样品前处理，如需将细胞破坏，提取其中的蛋白或核酸序列进行分析。而相对简单的药敏试验法虽然无需破坏细胞，但经16h传代后继续与药物培养24h甚至48h显得耗时较长。综上，这些方法无法快速又简单地对耐药型白色念珠菌进行判定。

拉曼光谱法由于具备几乎无样品处理(无需破坏细胞)、快速检测(几分钟)的特点，最近几年常常被用于微生物的鉴别与区分。但由于拉曼信号的微弱，导致该方法的区分准确度不够。若要增强信号需要耗费较大用量的样品。而表面增强拉曼光谱(SERS)技术因其较高的检测灵敏度(相对于常规的拉曼光谱，SERS信号可以增加好几个数量级，因此仅需要较少的细胞用量)，可以克服这一缺陷。同时光谱信号得到增强后更加丰富的特征峰将会更有利于区分准确度的提高。通常我们在利用表面增强拉曼光谱法判定耐药型白念株菌时，以敏感型白色念珠菌作为参照。而敏感型和耐药型白色念珠菌在培养传代的过程中产生的物质成分变化差异极其微小，通常仅仅凭某个特征峰的峰位识别难以将敏感型和耐药型白色念珠菌区分。

针对上述方法在区分敏感型和耐药型显示的不足，化学计量学法如聚类分析法、主成分分析法、偏最小二乘判别分析法等被用于对光谱信号的进一步处理来放大细微的差异。但这些方法需要大量的数据，而且处理这些数据需要编写程序代码。这些步骤对于临床检测人员来说显得过于复杂，并不适合于实际的运用。而如果通过这些化学计量学的方法寻找出几个特征SERS峰的峰强比及相应的判别标准则会显得十分简单而且更加适用于临床一线。

发明内容

本发明的目的在于通过找出上述所讲的几个特征峰强比来对敏感型和耐药型白色念珠菌进行快速、简单、准确的区分，从而能够实现对耐药型白色念珠菌的早期判定。

为了实现上述目的，本发明提供一种快速判定耐药型白色念珠菌的方法，包括以下步骤：

步骤一：动态表面增强拉曼光谱的采集

将待测白色念珠菌与等体积的表面增强试剂混合，取混合液滴于硅片上；采用拉曼光谱仪，对硅片上的液滴进行连续的拉曼光谱采集，直到液滴由湿态挥发至干态，得到一系列一维动态表面增强拉曼光谱图；

步骤二：光谱的预处理

对步骤一获取的光谱图进行预处理，预处理包括选取600～1800cm^-1光谱范围，在选取范围内对光谱进行airPLS法基线校正，Whittaker-Smooth法平滑；选取预处理后每株菌连续采集得到的最大强度(以最高峰656cm^-1为标准)的光谱进行后续的判别；

步骤三：根据特征峰与最高峰的峰强比范围来判定未知敏感度的白色念珠菌

通过以下3个特征峰，分别为724cm^-1、1094cm^-1、1465cm^-1与最高峰 656cm^-1的比值及相应的判别标准，鉴定待测白色念珠菌为敏感型还是耐药型；其判定标准为：I₇₂₄/I₆₅₆>0.6或I₁₀₉₄/I₆₅₆>0.13或I₁₄₆₅/I₆₅₆>0.24，则判定为耐药型白色念珠菌；I₇₂₄/I₆₅₆<0.4或I₁₀₉₄/I₆₅₆<0.09或I₁₄₆₅/I₆₅₆<0.22，则判定为敏感型白色念珠菌。

优选的，所述的步骤一中的待测白色念珠菌为传代16-20h的白色念珠菌。

优选的，所述的步骤一中取1-3μL混合液滴于硅片上。

优选的，所述的步骤一中激光强度为100-300mW，采集时间为1-10s。

优选的，所述的步骤一中每株菌采集5-10次。

与现有技术相比，本发明的技术方案的优点和积极效果如下：

1、步骤简单，耗时较短